一 準(zhǔn)備樣品
樣品的前處理:
1. DNA 樣品的離子強(qiáng)度要比緩沖液的低
2. DNA 樣品是去蛋白
3. 上樣量不超過 1.5ug
4. 了解待回收的 DNA 片段大小
5. 20ul DNA 樣品(TE 溶解)+5ul marker/上樣緩沖液(3%、2%、1.5%),混勻
震蕩離心。0.75%預(yù)置膠 20ulDNA 樣品+5ul 上樣緩沖液,marker 一個泳道直接 25ul。
二 編程
Protocol Editor 界面下: 1. 選擇新建 Protocol 2. 選擇預(yù)制膠種類 3. 設(shè)置回收的片段大小 4. 指定參考泳道(內(nèi)標(biāo)/外標(biāo)) 5. 默認(rèn)選擇“洗提完成后終止”。
三 光學(xué)校正(Pippin HT 校正系數(shù)是 0.7)
將光學(xué)校正板黑色一面朝下,放到泳道卡槽內(nèi),點(diǎn)擊“校正”。每次實(shí)驗(yàn)前都必
須要進(jìn)行光路校正。
四 準(zhǔn)備預(yù)制膠
1 檢查預(yù)制膠
a 檢查預(yù)制膠中緩沖液量,不足加滿。
b 檢查凝膠柱是否斷裂
c 檢查是否有氣泡
2 準(zhǔn)備上樣
a 排除洗提孔后面的氣泡
b 撕掉密封條,將預(yù)制膠置于儀器槽內(nèi)
c 從上方的每個緩沖液孔中吸走 80ul 緩沖液(3%、2%、1.5%預(yù)置膠); 或者吸
走 150ul 緩沖液(0.75%預(yù)置膠)。
d 清空洗提孔中的緩沖液, 加入 30ul 的新鮮緩沖液
e 用膠帶封閉洗提孔
f 檢查樣品孔溶液,不足時(shí)補(bǔ)滿至 40ul
3 連續(xù)性檢查(測試電流。連續(xù)性跟溫度有關(guān)系,所以緩沖液要提前從冰箱中拿
出進(jìn)行室溫平衡)
五 上樣
吸掉 30ul 緩沖液,加入 25ul 樣品,合上蓋。
六 運(yùn)行程序
七 回收目的片段