概述：呼出氣冷凝液（EBC）研究的便攜式采集裝置

Rtube呼出氣凝液采集裝置的設(shè)計具有易用性；無監(jiān)督病人在家、在工作場所、在醫(yī)院、在實驗室、在診所都能方便使用。這種非侵入性的手持設(shè)備是完全獨立的、一次性的。病人正常呼吸到設(shè)備中，Rtube將采集的氣息凝結(jié)在一個便捷式的可郵寄的容器中。

這一獨特的功能使得Rtube很容易地集成到現(xiàn)有的研究中，使得使用者在診所、醫(yī)院、家里、工作地點、學(xué)�；蛉魏纹渌�合理的環(huán)境的大量的EBC數(shù)據(jù)的采集更加方便。該收集器的易用性和使用環(huán)境的靈活性為利用EBC的PH值和其他潛在生物標(biāo)志物的臨床診斷的發(fā)展提供了可能。

產(chǎn)品特點：

已使用100000多次，結(jié)果可重復(fù)、可靠

密封冷凝管能夠通過簡單的郵件運(yùn)送以進(jìn)行集中的樣品分析

無需離心機(jī)！利用注射器式柱塞作用，即使是最微小的液滴冷凝水，也能將其從冷凝管壁刮入采集到單液池，以進(jìn)行分析

大的“三通”部分將唾液從呼吸氣體中分離，并防止其進(jìn)入冷凝管

鴨嘴閥/噴嘴提高冷凝效率，并產(chǎn)生高凝析樣品量

一次性設(shè)計確保隨時使用到的都是清潔的設(shè)備。沒有清洗！

一次性使用設(shè)計消除了任何傳染病交叉污染的機(jī)會

簡單的手持設(shè)備易于無監(jiān)督主體在家使用

我們的特殊閥組件是有效的樣品采集的關(guān)鍵，并允許無監(jiān)督主體輕松地收集和存儲無污染的樣品。在正常的平靜潮式呼吸工作下，對于孩子而言，典型的凝液產(chǎn)量為100微升/分鐘；對于成人而言，為200微升/分鐘

獨特的單向閥使得最大粒子鑲嵌在冷凝表面，并充當(dāng)一個柱塞。匯集靠近管的上端的樣品的能力允許采樣工作在數(shù)秒內(nèi)完成

 

該Rtube收集系統(tǒng)利用惰性的， FDA批準(zhǔn)的聚丙烯材料，使得吸水最小。藍(lán)色單向閥是由美國FDA批準(zhǔn)的硅橡膠制成的。醫(yī)用級塑料密封件的端蓋用于長期儲存樣品。還提供了一個標(biāo)簽，讓研究人員或主體記錄收集物的名稱和日期。每一支Rtube產(chǎn)品都經(jīng)過嚴(yán)格規(guī)范地組裝和清理，放置在一個單獨的密封袋中，包裝的交付給你。為了您的方便，我們提供了一些專業(yè)套件以滿足廣大客戶的一些最常見的需求。讓我們幫你選擇最適合你的需要的Rtube專業(yè)工具。

 

 

冷卻套

冷卻套是高效的冷凝液的收集所必需的。通常存儲在實驗室冰箱直到需要，套管被設(shè)計成能輕易地包過Rtube設(shè)備，為冷凝液的收集創(chuàng)造完美的條件。每一個冷卻套都包含一個絕緣罩。

我們高品質(zhì)的冷卻套都是由固體鋁冷加工而成，并為在最苛刻的凍融條件下重復(fù)使用而設(shè)計。

 

標(biāo)準(zhǔn)柱塞

 

由固體鋁制成，這是一個獨立的設(shè)備，利用注射器式柱塞將其內(nèi)置到Rtube設(shè)備中是很有必要的。單向閥能夠很容易地沿著聚丙烯壁滑動，并且便于匯集靠近管的上端的樣品。

 

 

使用說明：

呼出氣冷凝技術(shù)是一種收集呼出氣體樣本用以評估一系列疾病參數(shù)的非入侵性的采集方法。該Rtube設(shè)備的設(shè)計目的是為了高效的樣本采集效率。呼出的空氣通過一個獨特的單向閥進(jìn)入冷卻室，呼吸中的蒸氣、（氣體中的）浮粒和水分沿著Rtube的保護(hù)內(nèi)壁在那里凝聚。之后單向閥用作柱塞收集粘在內(nèi)壁上的微滴并將樣品保存在Rtube頂部附近。

 

Rtube EBC收集器及配件

Rtube設(shè)備被設(shè)計為一次性的、單一用途的產(chǎn)品。冷卻套、絕緣套和柱塞完全可重復(fù)使用。

最關(guān)鍵的特征是Rtube有能力實現(xiàn)冷凝液樣本的收集、儲存、運(yùn)輸、分析工作在一個Rtube設(shè)備內(nèi)完成。一般不要求將冷凝液轉(zhuǎn)移到其他的設(shè)備，最大限度的減小實驗室和病人在家使用的復(fù)雜度。幾乎消除了樣品受到污染的機(jī)會，并且使得樣品處理所需的勞動量最小化。每一個步驟都經(jīng)過精心設(shè)計以減少 病人、研究人員以及實驗室技術(shù)人員的工作量和工作的復(fù)雜度。該系統(tǒng)的設(shè)計使得其即使是在非常大的臨床研究中也是方便使用的。

 

在正常的平靜潮式呼吸工作下，對于孩子而言，典型的凝液產(chǎn)量為75-150微升/分鐘；對于成人而言，為100-250微升/分鐘。正常呼吸2分鐘的凝液產(chǎn)量足以滿足大多數(shù)的實驗室測試需要。然而常用的采集時間是7-10分鐘，以便將額外的樣品冷藏起來用于其他的研究。

 

這些樣品可以在無人監(jiān)督的情況下在受試者的家里或在工地很容易地收集起來，然后合理地將樣品提供給相關(guān)機(jī)構(gòu)用于職業(yè)病學(xué)和毒理學(xué)研究。另外，根據(jù)最近FDA的要求，認(rèn)為對氣道炎癥的客觀測量，如那些在呼出氣冷凝液中發(fā)現(xiàn)的樣本數(shù)據(jù)，對于旨在衡量消炎藥的療效的臨床研究具有重要意義。

典型的5步收集過程如下所示，為了清楚起見省略了一些細(xì)節(jié)，請閱讀本手冊的最后關(guān)于注意事項和常規(guī)檢測信息的部分。

以下對5個步驟分別進(jìn)行詳細(xì)說明：

注意：患者在EBC收集前的一小時內(nèi)不能吃或喝任何東西

步驟1：使用Rtube凝結(jié)呼出的氣息

步驟2：存儲/運(yùn)輸冷凝液

步驟3：使用柱塞使呼出氣凝液匯聚在Rtube頂部進(jìn)行收集

步驟4：（可選）除去二氧化碳（用于PH值測量）

步驟5：分析樣品

1.2準(zhǔn)備Rtube設(shè)備

   該Rtube設(shè)備在大多數(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，可直接使用。但是，如果研究的呼出氣凝液中的化合物可能同時是在實驗室環(huán)境中的污染物，應(yīng)采取額外的預(yù)防措施，這些包括但不限于硝酸鹽和亞硝酸鹽。我們建議您使用達(dá)到或超過ASTM D 1193 規(guī)范Ⅰ型或Ⅱ型試劑級的超純?nèi)ルx子水清洗冷凝室，并使得他們在使用前徹底干燥以消除任何可能的污染。

 

1.3填寫位于收集管的一邊的標(biāo)簽，并注意位于標(biāo)簽上的紅色箭頭的位置，應(yīng)該在收集的過程中朝上。

 

1.4將藍(lán)色的絕緣罩放置在鋁冷卻套上，以便保護(hù)你的手，并保持鋁冷卻套低溫。

 

1.5將鋁套放置在收集箱外

  

1.6患者應(yīng)立即通過紅色箭頭指向向上的吹嘴開始呼吸。在某些情況下，患者會有一個很淺的呼吸模式，應(yīng)鼓勵患者努力呼氣直到能“聽到自己的呼吸聲流過Rtube設(shè)備的頂部”。單向閥將通過冷卻套筒將呼出的空氣直接引導(dǎo)到樣品收集的地方。經(jīng)過長時間的貯存，在嘗試初次的呼氣時，Rtube設(shè)備可能呈現(xiàn)出一些阻力；這是正�，F(xiàn)象，并且通過預(yù)驗證程序很容易在這里糾正。

1.7在Rtube設(shè)備的適用中收集的時間應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化；在大多數(shù)應(yīng)用情況中，我們建議收集時間定為5-7分鐘。

1.8當(dāng)樣品收集工作完成并做好適當(dāng)保存，患者應(yīng)將吹嘴處理掉并將冷卻套放回保護(hù)袋凍結(jié)。

 

 

步驟2：儲存/運(yùn)輸凝析液

2.1拆下吹嘴并丟棄，將Rtube對著藍(lán)色鴨嘴閥的端口或紅色箭頭的一端用封蓋蓋上。另一端也可以蓋上。我們可以根據(jù)客戶需求提供額外數(shù)量的封蓋，詳情可電話咨詢。               

       

2.2將樣品在適當(dāng)?shù)臏囟认吕鋬觯蝗绻�所研究的化合物適合，也可在室溫條件下放置。在研究性質(zhì)穩(wěn)定的化合物時，可在室溫或在家/實驗室冷凍室里儲存，直至需要。如果包裝得當(dāng)并且遠(yuǎn)離高溫，樣品可通過郵件郵寄，樣品液不會受到任何污染和損失。事實上，Rtube設(shè)備是如此的簡單易用，無監(jiān)督主體應(yīng)該能夠從他們的醫(yī)院病床上、在他們的工作場所或者從他們自己舒適的家里完成所有的采樣工作。當(dāng)研究常見的實驗室污染物時，應(yīng)盡快將樣品從收集器中取出并儲存在冷凍柜里。

 

2.3 在解凍之前，一定要拆下較低一端的（與紅色箭頭指向相反的一端）封蓋。只要拆下較低一端的封蓋，Rtube設(shè)備得以泄壓，確保解凍過程中樣品得到保護(hù)。保持上端的封蓋一直塞著直至樣品完全解凍，并準(zhǔn)備進(jìn)行分析。

 

步驟3：利用柱塞收集匯聚于Rtube設(shè)備頂部的呼吸氣凝液

3.1 在實驗室里，取下封蓋，用單向鴨嘴閥朝著管子的頂部塞，使得樣品凝結(jié)于Rtube頂部，更便于收集。簡單地將Rtube放置于超過標(biāo)準(zhǔn)柱塞頂部的位置并向下推直至Rtube觸及標(biāo)準(zhǔn)柱塞的底部。確保在這個過程中，紅色箭頭標(biāo)記始終是指向上的。隨著Rtube被向下推在柱塞上，柱塞末端的突出部分與鴨嘴閥相接觸，冷凝表面的整個長度很像一個注射器。其結(jié)果是一個整潔的0.5ml-1.5ml的純呼出氣冷凝液池，用于分析研究。

 

3.2 注射器式柱塞使凝液匯聚于Rtube頂部，使得樣品采集變得簡單。

 

 

步驟4：（可選）除去二氧化碳（PH值測量所需）

我們目前正在修改我們的PH排氣柱塞并且我們將很快為Rtube設(shè)備提供一個用于排氣封附件。當(dāng)我們的客戶需要除去樣品中氣體的臨時解決途徑時，請參考下方列出的簡單操作。（詳情也可電話咨詢）。

 

4.1你將需要一個無二氧化碳?xì)怏w的資源。我們推薦氬氣，但氧氣和氮氣也是適合的。你還需要一個用于檢測非常稀的液體的微型PH探針、一個水箱調(diào)節(jié)器、一個裝管和巴斯德玻璃吸液管。

4.2呼出氣冷凝液的樣品在1.5ml的微量離心管中以150ul等分

4.3將裝管的一端與水箱調(diào)節(jié)器相連，另一端與玻璃管連接起來

4.4打開氬氣流（漸漸地）

4.5慢慢地把吸管插入樣品，通過調(diào)節(jié)水箱的流量直至樣品以穩(wěn)定的速度起泡，以防止樣品冒泡溢出微量離心管

4.6從樣品中除去氬氣管，但留下一個溫和的氬氣流過樣品的頂部。這很溫和的流量將有助于阻止周圍的二氧化碳再次進(jìn)入樣本。但會隨之一起快速移動。將微探針插入樣品，等待樣品的PH值穩(wěn)定。不要將PH電極對著微量離心管的底部，因為這樣可能會影響到PH值讀數(shù)的精確性。我們建議將電極的尖端提起到呼出氣冷凝液樣品的中央，然后再記錄PH值。

 

步驟5：分析樣品

5.1這一步當(dāng)然取決于你所感興趣的物質(zhì)。這個物質(zhì)可能是不穩(wěn)定的，需要快速分析，或者該物質(zhì)也可能是非常穩(wěn)定的（如PH值的情況），可在任何時候進(jìn)行分析。

 

Rtube被設(shè)計成一次性的、單一使用的物品。冷卻套、絕緣套和柱塞完全可重復(fù)使用。

最關(guān)鍵的特征是Rtube有能力實現(xiàn)冷凝液樣本的收集、儲存、運(yùn)輸、分析工作在一個Rtube設(shè)備內(nèi)完成。一般不要求將冷凝液轉(zhuǎn)移到其他的設(shè)備，最大限度的減小實驗室和病人在家使用的復(fù)雜度。幾乎消除了樣品受到污染的機(jī)會，并且使得樣品處理所需的勞動量最小化。每一個步驟都經(jīng)過精心設(shè)計以減少 病人、研究人員以及實驗室技術(shù)人員的工作量和工作的復(fù)雜度。該系統(tǒng)的設(shè)計使得其即使是在非常大的臨床研究中也是方便使用的。

Rtube的使用準(zhǔn)備

1. 除去包裝并將端蓋放在一邊
2. 向下看rtube的頂部，注意頂端的鴨嘴閥的方位
3. 用拇指和食指握住Rtube，這樣使得閥的頂部與你的手指處在一條線上。注意閥頂端方位的變化。相應(yīng)地調(diào)整手指的位置并輕輕地擠壓Rtube
4. 擠壓藍(lán)色鴨嘴閥并驗證其是否伸縮。這可打破其在存儲期間可能形成的任何輕微的粘連，并使得閥能夠自由地打開
5. Rtube現(xiàn)在做好了使用準(zhǔn)備。緊密地監(jiān)視研究對象(病人)；如果他/她呼氣無法通過設(shè)備，請丟棄該Rtube。

信息：PH值檢測指南

PH測定收集：呼出氣冷凝液可以常規(guī)方法收集。收集系統(tǒng)的特別準(zhǔn)備工作并不是必要的，盡管專用設(shè)備可能是有效的（見下文）。每分鐘通氣量并不影響除氧的呼出氣冷凝液的PH值，雖然PH測量值可能與是否除氧相關(guān)。我們建議將冷卻套儲存在-18℃到10℃之間的采集溫度，直到立即使用之前。請注意：過濾器的選用并不影響PH值的測量。

我們建議PH值測量前除氧。氬（約300毫升/分鐘），通入約200-600微升到呼出氣冷凝液，大約8分鐘，一般得到的是令人滿意的完全穩(wěn)定的PH值。我們甚至建議在除氧過程中或之后，特別是呼出氣冷凝液還在氬中時，立即測量PH值。氬氣比空氣重，所以往往用作防止快速從大氣中吸收二氧化碳的防護(hù)罩（二氧化碳會使得呼出氣冷凝液酸化）。除氧測量有助于確保讀數(shù)的穩(wěn)定性。注意當(dāng)呼出氣冷凝液PH值在除氧前小于5.5左右，在除氧過程中是不大可能改變很多的。當(dāng)PH值為6.5以上，除氧將可能引起PH值大幅上升，進(jìn)入到從中到高再到7的PH值范圍。就所有對呼出氣冷凝液的檢測來說，我們對什么接觸到了樣品非常謹(jǐn)慎，盡管PH值是穩(wěn)定的，似乎并沒有受到實驗室錯誤的嚴(yán)重影響。

 

注意：如果你想使用一個非除氧的樣品通過呼出氣冷凝液研究多種生物標(biāo)志物；在對樣品進(jìn)行除氧并測量PH值之前，簡單的將呼出氣冷凝液等分到一個微型離心管。

 

測PH需要的儲存：不需要特殊條件。我們用Rtube或Phtube本身來存儲所有樣品（兩者都是由聚丙烯、聚四氟乙烯、硅橡膠構(gòu)成），或者存儲在聚丙烯離心管直到進(jìn)行檢測。我們傾向于將樣品冷凍在-20℃~-80℃之間，但是已發(fā)現(xiàn)有樣品在室溫下存儲多年后進(jìn)行PH檢測，能呈現(xiàn)出卓越的可重復(fù)性。

信息：氨的測定指南

氨測定：大部分被困在呼出氣冷凝液的氨來自上呼吸道。我們相信急性哮喘患者的呼出氣冷凝液中的氨含量如此低的原因是因為患者本人的通氣道襯液酸化，因此俘獲氨（或許促進(jìn)擴(kuò)散進(jìn)入血液）。氨作為一個非常敏感和容易衡量的呼出氣冷凝液指標(biāo)，但在健康的受試者身上有著顯著的變化。（然而急性哮喘患者的變化最小，所有急性哮喘患者的氨值都非常低，甚至檢測不到氨水平）目前還沒有與呼出氣冷凝液中氨的穩(wěn)定性相關(guān)的嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯堪咐�，但是廣泛的實踐經(jīng)驗表明，呼出氣凝液中的氨濃度在室溫下至少能穩(wěn)定保存數(shù)周，在-20℃的情況下能穩(wěn)定保存數(shù)年。呼出氣凝液中的氨濃度在除氧過程中會上升幾個百分比，可能是因為水分從呼出氣冷凝液中蒸發(fā)的緣故。氨具有一個潛在的優(yōu)勢，它可以在未經(jīng)處理的樣品中用簡單的商用比色試紙被測量。該測量完全可以由個體主體在家完成，但是，在實驗室，我們使用一種來自Sigma的商業(yè)的光譜光度氨測量設(shè)備。我們已經(jīng)修改了這一商業(yè)分析，使得測量的速度更快，使用的樣品和試劑更少。我們可以按要求提供該修改的說明。

信息：硝酸鹽和亞硝酸鹽的測定指南

硝酸鹽和亞硝酸鹽的收集：當(dāng)研究硝酸鹽或亞硝酸鹽離子時，呼出氣冷凝液的收集、存儲和分析需要用到嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募夹g(shù)。硝酸鹽和亞硝酸鹽是無處不在的實驗室污染物，每一處潮濕的地表都有攜帶。人的指尖這些離子也非常豐富。通過覆蓋保護(hù)實驗室表面是不夠的，因為硝酸鹽和亞硝酸鹽由一氧化氮（NO）氧化形成，并且?guī)缀踉谒�有的實驗室和診所、尤其是呼吸門診，都有一定濃度的存在。NO也能穿過塑料覆蓋物。在乳膠手套的表面可能有非常高水平的氮氧化物。微型離心管和其他檢測管總是被氮氧化物大大污染。

 

對我們來說從收集系統(tǒng)和存儲容器中消除呼出氣冷凝液里的一些氮氧化物污染似乎非常困難。這是一個重要的問題，特別是亞硝酸鹽，因為亞硝酸鹽是在低到亞微摩爾的范圍內(nèi)在呼出氣凝液里被發(fā)現(xiàn)的，因此，雖然污染不可避免，但是可以從主體覆蓋該信號。此外，亞硝酸鹽在水溶液中會氧化成硝酸鹽（例如，使用過氧化氫作為氧化劑）或轉(zhuǎn)化為NO（通過質(zhì)子化并在分解亞硝酸過程中不釋放）。這些過程可以降低樣品在存儲過程中的亞硝酸鹽的水平。

由于這些問題，我們提出以下建議，關(guān)于呼出氣凝液收集中的氮氧化物：

1. 注意不要讓手指碰到任何會與呼出氣凝液接觸的表面。這包括離心管端蓋的內(nèi)側(cè)（一個經(jīng)常被忽略的容易被污染的部位）和Rtube設(shè)備端蓋的內(nèi)側(cè)。在處理任何可能與冷凝物接觸的表面時，我們建議您戴上手套，然后用去離子水沖洗戴著手套的手。更可取地，使用經(jīng)過制造商預(yù)沖洗并含有低萃取離子的手套，這些手套通過研究供應(yīng)目錄已隨時可得。
2. 我們強(qiáng)烈主張在使用前盡快用蒸餾水或者去離子水沖洗Rtube設(shè)備，如果你正在計劃對氮氧化物進(jìn)行檢測。一個簡單的沖洗，消除了幾乎所有可能從環(huán)境污染中呈現(xiàn)的亞硝酸鹽和硝酸鹽。我們有一個可行的沖洗和干燥Rtube接觸冷凝液的組件的有效方法。詳情請聯(lián)系我們。
3. 研究氮氧化物時，我們建議完成收集后盡快塞住Rtube并移除呼出氣凝液樣品（最好在數(shù)小時之內(nèi)），并且將呼出氣凝液樣品放置在經(jīng)去離子水預(yù)沖洗再經(jīng)空氣強(qiáng)制干燥的聚丙烯離心管內(nèi)。

• 我們建議采集完成后盡快對亞硝酸鹽進(jìn)行檢測。質(zhì)子化會造成亞硝酸鹽的損失，使得呼出氣凝液發(fā)生最積極的酸化反應(yīng)（比如已發(fā)現(xiàn)的急性哮喘、囊性纖維化、慢性阻塞性肺病、支氣管擴(kuò)張以及普通感冒后不久）。因此，亞硝酸鹽會從呼出氣凝液中快速損失（幾天之內(nèi)），也就是病人最不舒服的時候。此外，亞硝酸鹽初始含量越高，亞硝酸鹽損失也越快。鑒于患病病人的呼出氣凝液中的亞硝酸鹽含量是最高的——同時呼出氣凝液的PH值是最低的，如果不立即進(jìn)行檢測，在這些患者中可能看到的實質(zhì)性差異往往是不確定的。

 

• 硝酸鹽通常被作為總氮氧化物 (NOx)測量。我們首先要求，為使得氮氧化物的檢測結(jié)果更清楚，報告為總氮氧化物或硝酸鹽+亞硝酸鹽，或硝酸鹽的本身。硝酸鹽在儲存過程中不會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，雖然在儲存過程中，硝酸鹽水平會隨著亞硝酸鹽的氧化而輕微升高。
• 半胱氨酰白三烯測定指南
• ：我們沒有確定任何特殊的收集關(guān)注，如果你研究的對象是胱氨酸。然而，反復(fù)冷凍解凍會降低胱氨酸穩(wěn)定性的可能性是存在的，但這也不是十分確定。如果這是一個問題，然后在0℃或更高的氣溫下收集呼出氣凝液能優(yōu)化其穩(wěn)定，就像在0℃以下一樣。沒有空氣流動的情況下，呼出氣凝液將會被冷凝器不斷地凍結(jié)，在呼出溫暖的空氣穿過冷凝器期間解凍。我們并沒有嚴(yán)格地研究這些問題。

 

• ：這個試驗的困難，我們相信，是大多數(shù)人使用的商業(yè)用酶聯(lián)免疫吸附試驗中存在的準(zhǔn)確性和重復(fù)性的問題。最近，半胱氨酰白三烯的檢測標(biāo)準(zhǔn)似乎被提高了，質(zhì)譜檢測提供了一個更準(zhǔn)確的，但不太常用的方法，可用以證實酶聯(lián)免疫吸附試驗的結(jié)果。我們緊跟著最近的趨勢來報告這些酶聯(lián)免疫吸附試驗的結(jié)果為“半胱氨酰白三烯樣免疫反應(yīng)”，接受酶聯(lián)免疫吸附測定可能不對在呼出氣凝液檢測中具有高的特異性。