如何優(yōu)化E1-ClipTip電動移液器在連續(xù)分液功能上的性能？
連續(xù)分液是電動移液器最常用的功能之一，尤其適用于基于微孔板的相同體積重復分液操作。
多次分液功能背后蘊含的技術(shù)
電動移液器和連續(xù)分液器中的多次分液功能運用了反向移液技術(shù)。在反向移液中，吸入液體的體積比設(shè)定值更大。這個額外的體積作為補償，使得連續(xù)分配的每一步分液體積均等一致。因此，我們不能認為100μl溶液分10次排出，10μl/次的分液過程中，10個10μl的分液體積都是精確的。液體很有可能在最后一步之前就耗盡了。在反向移液控制的電動移液器和連續(xù)分液器中，完成最后一步分液操作后，剩余的溶液將通過“排凈”和“吹干”操作被棄掉。
E1-ClipTip連續(xù)分液功能
1. Stepper連續(xù)分液功能
連續(xù)分液功能是專為多次分液優(yōu)化設(shè)計的。根據(jù)分液次數(shù)和每次的分液體積，該功能自動計算用于完成分液序列所需的體積。為了滿足反向移液所需的體積，移液器將會額外吸入10%的設(shè)定體積作為補償。
例如, 用填充體積為300μl的10-300μl移液器時，移液器吸入體積大約330μl，但是顯示器顯示300μl。
由于反向移液技術(shù)本身和毛細作用，連續(xù)分液中第一步分液明顯比后面的步驟精度差，因此第一步分液需要棄掉，這能增加后面步驟的精確性。由于這些原因，在使用連續(xù)分液器時建議舍棄第一步的液體。
在Stepper連續(xù)分液模式中，會自動添加“預步驟”作為第一步，對于“預步驟”的分液建議直接棄掉或者返回原溶液中。為了減少液體浪費，預步驟的體積優(yōu)化為設(shè)定體積的3%左右。例如，一把10-300μl的移液器，預步驟體積大概為9μl。
預步驟的體積自動記入吸入體積中，如果顧客想最大限度減小液體用量，可以將“預步驟關(guān)掉。
2. Matrix 編程功能
Matrix編程模塊用于各種不同應用的復雜移液。基本理念是，用戶對每類移液操作（如吸入、排液、混合等等）進行程序關(guān)聯(lián)和模塊調(diào)用從而實現(xiàn)編程。需要注意的是，Matrix模塊默認為用戶在編程時，已經(jīng)將把可能影響移液結(jié)果的任何移液技術(shù)和影響因素都考慮在內(nèi)。這與preset預置功能不同，預置模塊中的移液功能已將最優(yōu)函數(shù)設(shè)置為默認值，從而確保移液的精確度。
Matrix 模塊中包括2種連續(xù)分液步驟：自動和多步。當使用多步或自動步驟時，建議使用如下設(shè)置以確保功能最佳
a. 吸液步驟: 在程序中涉及連續(xù)分液功能時，在吸取設(shè)定的體積后，還需吸取額外的10%設(shè)定體積，這是完成連續(xù)分液必須的。
注意. 這相當于反向移液的補償體積，而這在預置程序stepper中是自動完成的。
i. 例如，對于10-300μl移液器，需要大約30μl的額外補償體積用于完成整個系列分液。
ii. 當處理密度比誰高的液體時，建議吸取大于10%設(shè)定體積為補償溶液。
注意，以上建議取決于移液模式，不同的移液模式可能需要一個更小或更大的補償體積即可滿足需求。
b. 為了提高移液的精確性，建議在連續(xù)分液前添加一個附加的分液步驟，排出大約3-5%的溶液。
注意.
- 附加的分液步驟與連續(xù)分液Stepper模式中的“預步驟”功能類似。
- 當附加的分液體積接近移液器最小體積時，可將移液器的最小體積作為附加分液步驟的體積，作為正式分液前的“預步驟”。
如下實例，用于說明如何用10-300μl E1-ClipTip移液器在Matrix模式下編程10 x 20 μl連續(xù)分液操作。
連續(xù)分液Stepper和Matrix模式對比
由于連續(xù)分液stepper模式已經(jīng)經(jīng)過多步分液的最優(yōu)化設(shè)置，即吸液過程中使用反向移液技術(shù)，活塞移動允許吸入一個額外的體積。
Matrix 模式是為支持多種不同的移液模式而設(shè)計的，因此吸入過程中為普通的正向移液技術(shù)，活塞移動不允許吸入一個額外的體積。
當連續(xù)分液所需溶液的總體積接近移液器的最大量程時，建議使用連續(xù)分液Stepper模式，該模式已經(jīng)默認為吸入一個額外的體積。例如，當用10-300 μl 移液器進行10 x 30 μl的分液操作時，推薦使用stepper模式。
優(yōu)化多步分液功能的精確性
注意：單點校準曲線僅適用于一個特定體積的校準，因此僅能與相應的某一體積并用。
在E1-ClipTip的使用手冊中能找到如何創(chuàng)建單點校準曲線、存儲程序以及如何調(diào)用將該曲線進行校準的說明。
多步分液功能的指導規(guī)范
然而，電動移液器/連續(xù)分液器中的連續(xù)/多步分液功能均采用了反向移液技術(shù)。與正向移液技術(shù)不同，對空氣置換式移液器中的連續(xù)分液功能，沒有官方ISO標準作為指導，因此，Thermo Scientific 和其他廠家一樣，都沒有公布適用于這些功能的規(guī)范（準確度與精確度的標準）。
總結(jié):
·連續(xù)分液功能采用反向移液技術(shù)。
·連續(xù)分液需要在完成分液系列所需的理論體積之上的一個額外體積。
·為了優(yōu)化性能，推薦在移液序列中、多步分液系列之前添加一個額外的體積或一個預步驟。
·對于只使用連續(xù)移液的應用，建議使用預置程序中的連續(xù)分液模塊Stepper。
·當連續(xù)分液所需的總體積接近移液器的最大量程時，建議使用連續(xù)分液模式stepper。
·為了優(yōu)化某一步體積的精確度，建議為這個體積創(chuàng)建一個1-點校準程序。
·目前沒有公開發(fā)布的關(guān)于連續(xù)移液功能的指導規(guī)范。
