1 介紹
新的優(yōu)化的快速肽合成方法,結(jié)合平行多肽合成儀器,可以高通量地生產(chǎn)肽庫。
使用 Symphony X 全自動(dòng)高通量多肽合成儀探索合成方案的優(yōu)化,通過在偶聯(lián)步驟后去除 DMF 洗滌來減少循環(huán)時(shí)間并減少溶劑消耗和廢液產(chǎn)生。
2 方法和分析
使用 Fmoc-Gly-Wang 樹脂(取代度 0.32 mmol/g)在 Symphony X 多肽合成儀上以 20 μmol 的規(guī)模合成 65-74ACP 肽。在室溫下,用 20% Pip(DMF 中)進(jìn)行兩次脫保護(hù),每次 2.5 分鐘。洗滌:DMF 6 x 30 秒。在室溫下,以 100 mM AA(10 當(dāng)量)、100 mM HCTU(10 當(dāng)量)和 200 mM NMM(20 當(dāng)量)的最終濃度進(jìn)行偶聯(lián),每次 2 x 5 分鐘。使用的裂解混合物是 TFA/Anisole/H2O/EDT,反應(yīng)在室溫下進(jìn)行 2 小時(shí)。對每個(gè)肽進(jìn)行三次重復(fù).
將所得粗肽溶解于水中,使用 Varian ProStar HPLC 進(jìn)行分析,使用 C18、180 Å、5 um、250 x 4.6 mm 柱(Agilent Polaris),流速為 1 mL/min,使用 5-95% B 梯度洗脫,其中緩沖液 A 為含 0.1% TFA的水,緩沖液 B 為含0.1% TFA的乙腈。檢測波長為 214 nm。質(zhì)譜分析在配備 C18、100 Å、2.6 um、50 x 2.1 mm 色譜柱 (Phenomenex Kinetex) 的 Shimadzu LCMS-2020 Single-Quad 質(zhì)譜儀上進(jìn)行,分析時(shí)間為 7 分鐘,流速為 1 mL/min,梯度為 5-50% B洗脫,其中緩沖液 A 為含 0.1% 甲酸的水,緩沖液 B 為含0.1% 甲酸的乙腈。
3 結(jié)果
通過減少偶聯(lián)后的清洗次數(shù),優(yōu)化了 65-74ACP 的合成。消除偶聯(lián)后清洗可將循環(huán)時(shí)間從 2.8 分鐘縮短至 2.3 分鐘,并將溶劑消耗量從 55 毫升縮短至 41 毫升,而不會(huì)顯著影響最終肽的純度(表 1)
表 1 洗滌方案對肽純度、循環(huán)時(shí)間和溶劑消耗的影響。肽序列:VQAAIDYING