TiYOTM 采用光漂白LED技術,強力淬滅自體熒光,大幅提高信噪比,呈現(xiàn)清晰無比的熒光圖像。特別適用于處理高度自發(fā)熒光的樣本。在使用TiYOTM時,您是否對于如何操作它還有很多的疑問?無從下手?
當遇到操作問題,如何解決呢?
Q:TiYOTM是在染色前還是染色后使用?
A:在染色前使用TiYOTM
Q:是否只需在裝滿PBS的托盤中放置好組織切片就可以用TiYOTM進行淬滅?
A:對于自體熒光較弱的樣品,只需將其插入TiYOTM就能獲得淬滅效果。若要獲得更充分的淬滅效果,我們建議先在室溫下用3%過氧化氫/甲醇預處理10min,PBS沖洗5min,再進行淬滅操作。
Q:TiYOTM可以用于活細胞嗎?
A:不可以;罴毎麜艿絋iYOTM的強LED照射,光刺激會導致細胞損傷,細胞即使未死亡也會受到影響。我們建議使用經(jīng)過多聚甲醛(PFA)、福爾馬林等固定后的樣品。
Q:人腦樣品進行2h淬滅后,會出現(xiàn)管狀信號。有什么解決辦法嗎?
A:對于腦和肝組織,如果條件允許,推薦采用灌注固定的方法。此外,血細胞會發(fā)出很強的自體熒光,所以就排出血液而言,灌注固定是個很好的方法。如果仍有血細胞殘留,建議在灌注固定液之前先用含肝素的PBS對組織進行一次回流沖洗。成功進行灌注固定的關鍵在于要保持固定液處于低溫狀態(tài)。
Q:可以使用表達綠色熒光蛋白(GFP)或紅色熒光蛋白(mCherry)的樣品嗎?
A:不僅自體熒光,像GFP或mCherry這樣的熒光也會被淬滅。如果您想使用表達GFP或mCherry的樣品,在淬滅后可以通過抗體染色的方法來檢測GFP或mCherry,不過這樣做可能會比較耗時。
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