m6A RNA甲基轉移酶METTL3抑制劑在體內和體外抑制前列腺癌進展
前列腺癌（Prostate cancer，PCa)是全球男性中最常見的惡性腫瘤之一，也是導致男性癌癥死亡的第二大原因。盡管雄激素受體（Androgen receptor，AR）信號通路在前列腺癌進展中至關重要，但長期雄激素剝奪治療（androgen deprivation therapy，ADT）最終會失敗，導致致命的去勢抵抗性前列腺癌（CRPC）。目前，AR靶向治療的抗性導致前列腺癌的治療仍存在挑戰(zhàn)，尋找新的治療靶點變得尤為重要。近年來表觀遺傳學的快速發(fā)展為研究 PCa 的進展、耐藥性和潛在治療靶點提供了新的途徑。
RNA修飾是一種重要的表觀遺傳調控機制，RNA N6-甲基腺苷（m6A）是人類最豐富的RNA修飾類型，在mRNA剪接、翻譯和降解的轉錄后調控中起關鍵作用。在許多癌癥類型中，m6A調節(jié)酶的異常表達與腫瘤發(fā)生、轉移、耐藥性和癌癥干細胞自我更新有關。m6A調控因子METTL3是前列腺癌（PCa）多種進展過程中的重要調控基因。已有報道稱METTL3抑制劑在某些癌癥類型中具有強大的腫瘤抑制能力。然而，METTL3抑制劑對PCa進展的詳細影響和機制以及它們與其他藥物的潛在協(xié)同作用尚不清楚。
2024年10月，中國醫(yī)學科學院藥物研究所Wu Meng團隊、北京醫(yī)院侯惠民團隊和浙江師范大學周金明團隊合作在《Biomedicine & Pharmacotherapy》期刊發(fā)表題為“METTL3 inhibitor suppresses the progression of prostate cancer via IGFBP3/AKT pathway and synergizes with PARP inhibitor”的科研成果。研究通過免疫組化染色、Western blot、qRT-PCR等方法揭示前列腺癌PCa中METTL3 過表達并與不良預后相關。研究還表明MTTTL3 抑制劑STM2457可以降低PCa細胞的m6A水平，從而抑制其增殖、集落形成、遷移、侵襲和干性。此外，STM2457在體內抑制細胞來源的異種移植物（CDX）和患者來源的異種移植物（PDX）PCa 模型的進展。MeRIP-seq分析與生物學驗證相結合揭示STM2457主要通過 IGFBP3/AKT 通路影響PCa細胞中的多個生物過程。TM2457誘導DNA損傷，并在體外和體內顯示出與 PARP 抑制劑奧拉帕尼（Olaparib）的協(xié)同抗PCa作用。總體而言，本研究為靶向 RNA m6A 修飾治療 PCa 提供了一種新的治療策略。
標題：METTL3 inhibitor suppresses the progression of prostate cancer via IGFBP3/AKT pathway and synergizes with PARP inhibitor（METTL3抑制劑通過IGFBP3/AKT通路抑制前列腺癌進展并與PARP抑制劑協(xié)同作用）
期刊：Biomedicine & Pharmacotherapy
影響因子： IF 6.9
技術平臺：MeRIP-seq、RNA-seq
研究設計：
圖形摘要
結果圖形：
1. METTL3 在大多數(shù) PCa 腫瘤和細胞系中過表達
圖1. 在前列腺癌（PCa）腫瘤和細胞系中METTL3的過表達和m6A水平。
A. 通過免疫組化（IHC）染色檢測了74名PCa患者的腫瘤和相鄰正常組織中METTL3的蛋白表達水平
B. 對圖1A中IHC結果的定量分析。
C. 在TCGA數(shù)據(jù)庫中，檢測了PCa腫瘤和相鄰正常組織中METTL3的mRNA表達水平。
D. 通過Western blot檢測了12名PCa患者的腫瘤和相鄰正常組織中METTL3的蛋白表達水平。
E. 對圖1D中Western blot結果的定量分析。
F. 通過qRT-PCR檢測了12名PCa患者的腫瘤和相鄰正常組織中METTL3的mRNA表達水平。
G. 檢測12名PCa患者的腫瘤和相鄰正常組織中總RNA的m6A水平。
H. 通過TCGA數(shù)據(jù)庫分析，高METTL3表達與PCa的預后不良顯著相關，P＜0.05。
I. 通過Western blot檢測了5種不同的PCa細胞系和1種正常成人前列腺上皮細胞系中METTL3的蛋白水平。
J. 對圖1I中Western blot結果的定量分析。
K. qRT-PCR檢測5種不同PCa細胞系和1種正常成人前列腺上皮細胞系中METTL3 mRNA表達水平
L. 檢測了5種不同PCa細胞系和1種正常成人前列腺上皮細胞系中總RNA的m6A水平。（實驗進行三次重復。結果表示為均值±標準差。*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001與對照組相比。）
2. METTL3抑制劑在體外抑制PCa細胞和類器官活力
圖2：STM2457對體外前列腺癌細胞和類器官活力的影響。
A. DU145、22Rv1、LNCaP、C4-2和PC-3細胞用DMSO、STM2457 1.25μM、2.5μM、5.0μM和10.0μM處理24小時，檢測不同細胞系和不同處理組的總RNA m6A水平。
B. 22Rv1、LNCaP、C4-2、DU145和PC-3細胞用不同濃度的STM2457處理6天，通過CCK8實驗檢測細胞增殖。
C. 用DMSO、STM2457 1.25μM、2.5μM、5.0μM、10.0μM和20.0μM處理22Rv1、LNCaP、C4-2、DU145和PC-3細胞12-14天，進行結晶紫染色法檢測。
D. 對圖2C中集落形成結果的定量分析。
E. 用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理22Rv1和DU145細胞24小時，通過Transwell遷移實驗檢測細胞遷移活性。
F. 對圖2E中Transwell遷移實驗結果的定量分析。
G. 用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理22Rv1和DU145細胞24小時，通過Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲活性。
H. 對圖2G中Transwell侵襲實驗結果的定量分析。
I. 用DMSO、STM2457 5.0μM和20.0μM處理22Rv1和DU145細胞48小時，通過高內涵成像分析系統(tǒng)進行細胞運動跟蹤。
J. 用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理22Rv1和DU145細胞2周，進行成球試驗(spheroid formation assay)檢測。
K. 3個前列腺癌患者源類器官用DMSO、STM2457 2.5μM、5.0μM和10.0μM處理約10天，然后通過顯微鏡觀察。
L. 3個前列腺癌患者源類器官用不同濃度的STM2457處理約10天，檢測類器官活力。
3. METTL3抑制劑在體內抑制PCa進展
圖3：STM2457對前列腺癌CDX和PDX模型體內進展的作用。
A. 22Rv1細胞異種移植腫瘤經對照或每天50mg/kg STM2457處理3周，最后一天拍攝腫瘤照片（n=4）。
B. 每隔一天監(jiān)測一次腫瘤體積增長。
C. 最后一天用電子秤測量腫瘤重量。
D. 每隔一天用電子秤監(jiān)測小鼠體重。
E. 檢測腫瘤組織的總RNA m6A水平。
F. 對收獲的腫瘤進行增殖（Ki-67）和凋亡（裂解的caspase 3）水平的免疫組化分析，
G. 對圖3F中IHC結果的定量分析。
H. 前列腺癌患者腫瘤的異種移植腫瘤經對照或每天50 mg/kg STM2457處理3周，最后一天拍攝腫瘤照片（n=5）。
I. 每三天監(jiān)測一次腫瘤體積增長。
J. 最后一天用電子秤測量腫瘤重量。
K. 每三天用電子秤監(jiān)測小鼠體重。
L. 檢測腫瘤組織的總RNA m6A水平。
M. 對收獲的腫瘤進行增殖（Ki-67）、神經內分泌分化（SOX2）和DNA損傷（γ-H2AX）水平的免疫組化分析。
N. 對圖3M中IHC結果的定量分析。
4. PCa細胞中受METTL3抑制劑影響的信號通路
圖4：STM2457導致前列腺癌細胞的全基因組m6A修飾和轉錄組變化。
A. 在用DMSO（n=3）或STM2457 10μM（n=3）處理的22Rv1細胞中進行MeRIP-seq分析，不同處理組的m6A peaks強度以小提琴圖表示。
B. 差異m6A峰（n=25369）分布在5'UTR、3'UTR、起始密碼子、終止密碼子、內含子、間隔區(qū)或CDS區(qū)域。
C. 維恩圖展示通過RNA-seq和MeRIP-seq檢測的顯著表達或m6A峰變化（FDR<0.05, p<0.05）的基因數(shù)量。
D. DMSO和STM2457組中差異m6A標記基因熱圖。
E. 在DMSO與STM2457組中，m6A峰和mRNA表達水平顯著變化的基因被分為4類：hypo-down（m6A峰下調，mRNA下調）；hypo-up（m6A峰下調，mRNA上調）；hyper-down（m6A峰上調，mRNA下調）；hyper-up（m6A峰上調，mRNA上調）。
F-G. 下調最多的前10個編碼基因的m6A峰（F）和最顯著的mRNA表達水平變化（G）。
H. DMSO和STM2457組轉錄組的KEGG分析。
I. GSEA揭示STM2457在22Rv1細胞中顯著下調細胞周期、氧化磷酸化和DNA復制途徑。
5. IGFBP3/AKT通路是METTL3抑制劑抗前列腺癌（PCa）效果所必需的
圖5：STM2457通過IGFBP3/AKT通路抑制前列腺癌細胞活力。
A. MeRIP-seq檢測22Rv1細胞中DMSO或STM2457組IGFBP3 mRNA 3'UTR的m6A峰分布差異。
B. 22Rv1細胞用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理48小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
C. C4-2細胞用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理48小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
D. LNCaP細胞用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理48小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
E. C4-2和22Rv1細胞用DMSO、STM2457 2.5μM、5.0μM和10.0μM處理48小時，通過western blot分析檢測IGFBP3蛋白水平。
F. 對圖5E中western blot結果的定量分析。
G. C4-2和22Rv1細胞用DMSO或STM2457 10.0μM處理48小時，通過western blot分析檢測p-AKT、AKT和IGFBP3蛋白水平。
H. 對圖5G中western blot結果的定量分析。
I. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
J. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，通過western blot分析檢測IGFBP3蛋白水平。
K. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用DMSO或STM2457 10μM處理24小時，通過western blot分析檢測p-AKT、AKT和IGFBP3蛋白水平。
L. C4-2細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用STM2457 5.0μM處理24小時、48小時、72小時和96小時，通過CCK8實驗檢測細胞活力。
M. 22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用STM2457 5.0μM處理24小時、48小時、72小時和96小時，通過CCK8實驗檢測細胞活力。
N. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用DMSO或STM2457 5.0μM處理12-14天，進行結晶紫染色分析。
O. 對圖5N中集落形成結果的定量分析。
6. METTL3抑制劑與PARP抑制劑聯(lián)合使用在體外顯示出增強的抗PCa活性
圖6：STM2457在體外與PARP抑制劑顯示出協(xié)同抗前列腺癌效果。
A. C4-2和22Rv1細胞用DMSO或STM2457 10.0μM處理72小時，通過western blot分析檢測p-AKT、AKT和γ-H2AX蛋白水平。
B. 對圖6A中相對γ-H2AX蛋白水平的定量分析。
C. 22Rv1細胞用DMSO或STM2457 10.0μM處理72小時，通過免疫熒光檢測γ-H2AX蛋白水平。
D. 22Rv1細胞用指定濃度的STM2457與奧拉帕尼聯(lián)合處理144小時，通過CCK8實驗檢測細胞增殖抑制活性。
E. 計算STM2457與奧拉帕尼在22Rv1細胞中的協(xié)同得分。
F. C4-2細胞用指定濃度的STM2457與奧拉帕尼聯(lián)合處理144小時，通過CCK8實驗檢測細胞增殖抑制活性。
G. 計算STM2457與奧拉帕尼在C4-2細胞中的協(xié)同得分。
H. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理12-14天，進行結晶紫染色。
I. 對圖6H中集落形成結果的定量分析。
J. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理24小時，通過Transwell遷移實驗檢測細胞遷移活性。
K. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理24小時，通過Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲活性。
L. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理48小時，然后通過高內涵成像分析系統(tǒng)進行18小時的細胞運動跟蹤。
M. 通過高內涵成像分析系統(tǒng)分析圖6L中22Rv1和DU145細胞的運動位移和速度。
7. METTL3抑制劑與PARP抑制劑協(xié)同作用，抑制體內PCa進展
B. 每三天監(jiān)測一次腫瘤體積增長。
C. 最后一天用電子秤測量腫瘤重量。
D. 每三天用電子秤監(jiān)測小鼠體重。
E. 對收獲的腫瘤進行增殖（Ki-67）和凋亡（裂解的caspase 3）水平的免疫組化分析。
F. 對圖7E中IHC結果的定量分析。
易小結
本研究地分析了METTL3抑制劑STM2457在不同細胞系、患者來源器官類器官(PDO)、細胞源異種移植模型(CDX)和患者源異種移植模型(PDX)中的前列腺癌(PCa)抑制活性。STM2457抑制了IGFBP3 3'UTR的m6A修飾，并促進IGFBP3的穩(wěn)定和過表達。隨后，IGFBP3降低了AKT的磷酸化水平，進而抑制METTL3過表達的PCa進展。此外STM2457誘導了DNA損傷，并在體外和體內均顯示出與PARP抑制劑的協(xié)同抗PCa效果。本研究首次證明了METTL3抑制劑在體外和體內都能抑制PCa進展，并為進一步的臨床試驗提供了有意義的參考。
參考文獻：
Chen X, Wang M, Wang H, Yang J, Li X, Zhang R, Ding X, Hou H, Zhou J, Wu M. METTL3 inhibitor suppresses the progression of prostate cancer via IGFBP3/AKT pathway and synergizes with PARP inhibitor. Biomed Pharmacother. 2024 Sep 3;179:117366. pii: S0753-3322(24)01251-4. doi: 10.1016/j.biopha.2024.117366. PubMed PMID: 39232384.
RNA修飾是一種重要的表觀遺傳調控機制，RNA N6-甲基腺苷（m6A）是人類最豐富的RNA修飾類型，在mRNA剪接、翻譯和降解的轉錄后調控中起關鍵作用。在許多癌癥類型中，m6A調節(jié)酶的異常表達與腫瘤發(fā)生、轉移、耐藥性和癌癥干細胞自我更新有關。m6A調控因子METTL3是前列腺癌（PCa）多種進展過程中的重要調控基因。已有報道稱METTL3抑制劑在某些癌癥類型中具有強大的腫瘤抑制能力。然而，METTL3抑制劑對PCa進展的詳細影響和機制以及它們與其他藥物的潛在協(xié)同作用尚不清楚。
2024年10月，中國醫(yī)學科學院藥物研究所Wu Meng團隊、北京醫(yī)院侯惠民團隊和浙江師范大學周金明團隊合作在《Biomedicine & Pharmacotherapy》期刊發(fā)表題為“METTL3 inhibitor suppresses the progression of prostate cancer via IGFBP3/AKT pathway and synergizes with PARP inhibitor”的科研成果。研究通過免疫組化染色、Western blot、qRT-PCR等方法揭示前列腺癌PCa中METTL3 過表達并與不良預后相關。研究還表明MTTTL3 抑制劑STM2457可以降低PCa細胞的m6A水平，從而抑制其增殖、集落形成、遷移、侵襲和干性。此外，STM2457在體內抑制細胞來源的異種移植物（CDX）和患者來源的異種移植物（PDX）PCa 模型的進展。MeRIP-seq分析與生物學驗證相結合揭示STM2457主要通過 IGFBP3/AKT 通路影響PCa細胞中的多個生物過程。TM2457誘導DNA損傷，并在體外和體內顯示出與 PARP 抑制劑奧拉帕尼（Olaparib）的協(xié)同抗PCa作用。總體而言，本研究為靶向 RNA m6A 修飾治療 PCa 提供了一種新的治療策略。
標題：METTL3 inhibitor suppresses the progression of prostate cancer via IGFBP3/AKT pathway and synergizes with PARP inhibitor（METTL3抑制劑通過IGFBP3/AKT通路抑制前列腺癌進展并與PARP抑制劑協(xié)同作用）
影響因子： IF 6.9
技術平臺：MeRIP-seq、RNA-seq
研究設計：
- 使用免疫組化染色、Western blot、qRT-PCR等方法檢測METTL3在前列腺癌組織和細胞系中的表達水平。
- 通過MeRIP-seq分析和生物學驗證，研究STM2457對前列腺癌細胞中m6A修飾的影響。
- 在體外細胞實驗和體內動物模型中評估STM2457對前列腺癌進展的影響。
- 通過藥物協(xié)同作用實驗，研究STM2457與PARP抑制劑的聯(lián)合治療效果。
圖形摘要
結果圖形：
1. METTL3 在大多數(shù) PCa 腫瘤和細胞系中過表達
圖1. 在前列腺癌（PCa）腫瘤和細胞系中METTL3的過表達和m6A水平。
B. 對圖1A中IHC結果的定量分析。
C. 在TCGA數(shù)據(jù)庫中，檢測了PCa腫瘤和相鄰正常組織中METTL3的mRNA表達水平。
D. 通過Western blot檢測了12名PCa患者的腫瘤和相鄰正常組織中METTL3的蛋白表達水平。
E. 對圖1D中Western blot結果的定量分析。
F. 通過qRT-PCR檢測了12名PCa患者的腫瘤和相鄰正常組織中METTL3的mRNA表達水平。
G. 檢測12名PCa患者的腫瘤和相鄰正常組織中總RNA的m6A水平。
H. 通過TCGA數(shù)據(jù)庫分析，高METTL3表達與PCa的預后不良顯著相關，P＜0.05。
I. 通過Western blot檢測了5種不同的PCa細胞系和1種正常成人前列腺上皮細胞系中METTL3的蛋白水平。
J. 對圖1I中Western blot結果的定量分析。
K. qRT-PCR檢測5種不同PCa細胞系和1種正常成人前列腺上皮細胞系中METTL3 mRNA表達水平
L. 檢測了5種不同PCa細胞系和1種正常成人前列腺上皮細胞系中總RNA的m6A水平。（實驗進行三次重復。結果表示為均值±標準差。*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001與對照組相比。）
2. METTL3抑制劑在體外抑制PCa細胞和類器官活力
圖2：STM2457對體外前列腺癌細胞和類器官活力的影響。
B. 22Rv1、LNCaP、C4-2、DU145和PC-3細胞用不同濃度的STM2457處理6天，通過CCK8實驗檢測細胞增殖。
C. 用DMSO、STM2457 1.25μM、2.5μM、5.0μM、10.0μM和20.0μM處理22Rv1、LNCaP、C4-2、DU145和PC-3細胞12-14天，進行結晶紫染色法檢測。
D. 對圖2C中集落形成結果的定量分析。
E. 用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理22Rv1和DU145細胞24小時，通過Transwell遷移實驗檢測細胞遷移活性。
F. 對圖2E中Transwell遷移實驗結果的定量分析。
G. 用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理22Rv1和DU145細胞24小時，通過Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲活性。
H. 對圖2G中Transwell侵襲實驗結果的定量分析。
I. 用DMSO、STM2457 5.0μM和20.0μM處理22Rv1和DU145細胞48小時，通過高內涵成像分析系統(tǒng)進行細胞運動跟蹤。
J. 用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理22Rv1和DU145細胞2周，進行成球試驗(spheroid formation assay)檢測。
K. 3個前列腺癌患者源類器官用DMSO、STM2457 2.5μM、5.0μM和10.0μM處理約10天，然后通過顯微鏡觀察。
L. 3個前列腺癌患者源類器官用不同濃度的STM2457處理約10天，檢測類器官活力。
3. METTL3抑制劑在體內抑制PCa進展
圖3：STM2457對前列腺癌CDX和PDX模型體內進展的作用。
B. 每隔一天監(jiān)測一次腫瘤體積增長。
C. 最后一天用電子秤測量腫瘤重量。
D. 每隔一天用電子秤監(jiān)測小鼠體重。
E. 檢測腫瘤組織的總RNA m6A水平。
F. 對收獲的腫瘤進行增殖（Ki-67）和凋亡（裂解的caspase 3）水平的免疫組化分析，
G. 對圖3F中IHC結果的定量分析。
H. 前列腺癌患者腫瘤的異種移植腫瘤經對照或每天50 mg/kg STM2457處理3周，最后一天拍攝腫瘤照片（n=5）。
I. 每三天監(jiān)測一次腫瘤體積增長。
J. 最后一天用電子秤測量腫瘤重量。
K. 每三天用電子秤監(jiān)測小鼠體重。
L. 檢測腫瘤組織的總RNA m6A水平。
M. 對收獲的腫瘤進行增殖（Ki-67）、神經內分泌分化（SOX2）和DNA損傷（γ-H2AX）水平的免疫組化分析。
N. 對圖3M中IHC結果的定量分析。
4. PCa細胞中受METTL3抑制劑影響的信號通路
圖4：STM2457導致前列腺癌細胞的全基因組m6A修飾和轉錄組變化。
B. 差異m6A峰（n=25369）分布在5'UTR、3'UTR、起始密碼子、終止密碼子、內含子、間隔區(qū)或CDS區(qū)域。
C. 維恩圖展示通過RNA-seq和MeRIP-seq檢測的顯著表達或m6A峰變化（FDR<0.05, p<0.05）的基因數(shù)量。
D. DMSO和STM2457組中差異m6A標記基因熱圖。
E. 在DMSO與STM2457組中，m6A峰和mRNA表達水平顯著變化的基因被分為4類：hypo-down（m6A峰下調，mRNA下調）；hypo-up（m6A峰下調，mRNA上調）；hyper-down（m6A峰上調，mRNA下調）；hyper-up（m6A峰上調，mRNA上調）。
F-G. 下調最多的前10個編碼基因的m6A峰（F）和最顯著的mRNA表達水平變化（G）。
H. DMSO和STM2457組轉錄組的KEGG分析。
I. GSEA揭示STM2457在22Rv1細胞中顯著下調細胞周期、氧化磷酸化和DNA復制途徑。
5. IGFBP3/AKT通路是METTL3抑制劑抗前列腺癌（PCa）效果所必需的
圖5：STM2457通過IGFBP3/AKT通路抑制前列腺癌細胞活力。
B. 22Rv1細胞用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理48小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
C. C4-2細胞用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理48小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
D. LNCaP細胞用DMSO、STM2457 2.5μM和10.0μM處理48小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
E. C4-2和22Rv1細胞用DMSO、STM2457 2.5μM、5.0μM和10.0μM處理48小時，通過western blot分析檢測IGFBP3蛋白水平。
F. 對圖5E中western blot結果的定量分析。
G. C4-2和22Rv1細胞用DMSO或STM2457 10.0μM處理48小時，通過western blot分析檢測p-AKT、AKT和IGFBP3蛋白水平。
H. 對圖5G中western blot結果的定量分析。
I. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，通過qRT-PCR檢測IGFBP3 mRNA水平，并與GAPDH歸一化。
J. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，通過western blot分析檢測IGFBP3蛋白水平。
K. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用DMSO或STM2457 10μM處理24小時，通過western blot分析檢測p-AKT、AKT和IGFBP3蛋白水平。
L. C4-2細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用STM2457 5.0μM處理24小時、48小時、72小時和96小時，通過CCK8實驗檢測細胞活力。
M. 22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用STM2457 5.0μM處理24小時、48小時、72小時和96小時，通過CCK8實驗檢測細胞活力。
N. C4-2和22Rv1細胞用si-IGFBP3或si-NC處理24小時，然后用DMSO或STM2457 5.0μM處理12-14天，進行結晶紫染色分析。
O. 對圖5N中集落形成結果的定量分析。
6. METTL3抑制劑與PARP抑制劑聯(lián)合使用在體外顯示出增強的抗PCa活性
圖6：STM2457在體外與PARP抑制劑顯示出協(xié)同抗前列腺癌效果。
B. 對圖6A中相對γ-H2AX蛋白水平的定量分析。
C. 22Rv1細胞用DMSO或STM2457 10.0μM處理72小時，通過免疫熒光檢測γ-H2AX蛋白水平。
D. 22Rv1細胞用指定濃度的STM2457與奧拉帕尼聯(lián)合處理144小時，通過CCK8實驗檢測細胞增殖抑制活性。
E. 計算STM2457與奧拉帕尼在22Rv1細胞中的協(xié)同得分。
F. C4-2細胞用指定濃度的STM2457與奧拉帕尼聯(lián)合處理144小時，通過CCK8實驗檢測細胞增殖抑制活性。
G. 計算STM2457與奧拉帕尼在C4-2細胞中的協(xié)同得分。
H. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理12-14天，進行結晶紫染色。
I. 對圖6H中集落形成結果的定量分析。
J. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理24小時，通過Transwell遷移實驗檢測細胞遷移活性。
K. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理24小時，通過Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲活性。
L. 22Rv1和DU145細胞用DMSO、STM2457 5.0μM、奧拉帕尼5.0μM和STM2457 5.0μM與奧拉帕尼5.0μM聯(lián)合處理48小時，然后通過高內涵成像分析系統(tǒng)進行18小時的細胞運動跟蹤。
M. 通過高內涵成像分析系統(tǒng)分析圖6L中22Rv1和DU145細胞的運動位移和速度。
7. METTL3抑制劑與PARP抑制劑協(xié)同作用，抑制體內PCa進展
圖7：STM2457在體內與PARP抑制劑顯示出協(xié)同抗前列腺癌效果。
A. 22Rv1細胞的異種移植腫瘤用空白對照、每天50mg/kg STM2457、每天50毫克/千克奧拉帕尼，以及每天50 mg/kg STM2457與50 mg/kg奧拉帕尼聯(lián)合處理3周，最后一天拍攝腫瘤照片（n=5）。B. 每三天監(jiān)測一次腫瘤體積增長。
C. 最后一天用電子秤測量腫瘤重量。
D. 每三天用電子秤監(jiān)測小鼠體重。
E. 對收獲的腫瘤進行增殖（Ki-67）和凋亡（裂解的caspase 3）水平的免疫組化分析。
F. 對圖7E中IHC結果的定量分析。
易小結
本研究地分析了METTL3抑制劑STM2457在不同細胞系、患者來源器官類器官(PDO)、細胞源異種移植模型(CDX)和患者源異種移植模型(PDX)中的前列腺癌(PCa)抑制活性。STM2457抑制了IGFBP3 3'UTR的m6A修飾，并促進IGFBP3的穩(wěn)定和過表達。隨后，IGFBP3降低了AKT的磷酸化水平，進而抑制METTL3過表達的PCa進展。此外STM2457誘導了DNA損傷，并在體外和體內均顯示出與PARP抑制劑的協(xié)同抗PCa效果。本研究首次證明了METTL3抑制劑在體外和體內都能抑制PCa進展，并為進一步的臨床試驗提供了有意義的參考。
參考文獻：
Chen X, Wang M, Wang H, Yang J, Li X, Zhang R, Ding X, Hou H, Zhou J, Wu M. METTL3 inhibitor suppresses the progression of prostate cancer via IGFBP3/AKT pathway and synergizes with PARP inhibitor. Biomed Pharmacother. 2024 Sep 3;179:117366. pii: S0753-3322(24)01251-4. doi: 10.1016/j.biopha.2024.117366. PubMed PMID: 39232384.
標簽：
RNA甲基化
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