在生物制品、藥品及醫(yī)療器械的生產(chǎn)過程中，熱原與細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測是確保產(chǎn)品安全放行的重要一環(huán)。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）通過一系列指導(dǎo)文件，如美國藥典（USP）第<85>章“細(xì)菌內(nèi)毒素檢測”、USP第<161>章“輸血和輸液組件及類似醫(yī)療器械”，以及美國醫(yī)療器械促進(jìn)協(xié)會(huì)（AAMI）ST72:2002/R2010《細(xì)菌內(nèi)毒素——檢測方法、常規(guī)監(jiān)測和批量檢測替代品》，為行業(yè)提供了詳盡的檢測建議和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。

本文旨在基于這些指導(dǎo)文件，并補(bǔ)充了藥典未涵蓋的監(jiān)管觀點(diǎn)，以明確FDA對產(chǎn)品熱原和細(xì)菌內(nèi)毒素檢測提交與維護(hù)的看法。今日首發(fā)第一期，誠邀您一探究竟！
 

Q1：對于中控測試和成品放行，如何建立取樣計(jì)劃?
針對制劑的CGMP法規(guī)和醫(yī)療器械質(zhì)量體系法規(guī)，要求研發(fā)控制措施時(shí)必須具備充分的科學(xué)性和制定恰當(dāng)?shù)娜�樣�?jì)劃。

盡管USP通則<85>未直接涉及取樣計(jì)劃的詳細(xì)信息，但AAMI ST72指南中提供了相關(guān)指導(dǎo)。制藥公司應(yīng)該增加一個(gè)取樣計(jì)劃作為應(yīng)用文件的一部分。在制定取樣計(jì)劃時(shí)，公司需全面考慮原輔材料、中間物料及成品中潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)，并特別關(guān)注制造設(shè)計(jì)因素，如工藝一致性、中控保持時(shí)間對細(xì)菌內(nèi)毒素水平的影響、細(xì)菌內(nèi)毒素去除步驟的有效性，以及成品內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)定。

此取樣計(jì)劃應(yīng)被視為動(dòng)態(tài)管理的一部分，初期應(yīng)追求最大覆蓋范圍以確保充分控制。隨著制造工藝的成熟和內(nèi)控能力的增強(qiáng)，公司可適時(shí)調(diào)整取樣計(jì)劃以優(yōu)化資源利用。在調(diào)整取樣計(jì)劃時(shí)，制藥公司必須及時(shí)更新其法規(guī)文件，確保與現(xiàn)行法規(guī)要求保持一致。

對于藥品和生物制品，取樣計(jì)劃的任何中間變更通常需作為年度報(bào)告的一部分進(jìn)行提交。而對于醫(yī)療器械，則可能需采取30天通知的方式，以便監(jiān)管機(jī)構(gòu)及時(shí)了解變更情況并進(jìn)行評估。

Q2：什么時(shí)候進(jìn)行復(fù)驗(yàn)是合適的?

在測試過程中，若遇到?jīng)_突性結(jié)果，制藥公司應(yīng)首先參考USP通則<85>中關(guān)于凝膠法測試的解釋部分，以獲取關(guān)于復(fù)驗(yàn)的明確指導(dǎo)。根據(jù)通則<85>的特別說明，當(dāng)測試在低于最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）時(shí)失敗，應(yīng)采取一個(gè)不超過MVD的更大稀釋倍數(shù)來進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。

在進(jìn)行復(fù)驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室必須詳細(xì)記錄所有測試過程，包括失敗的測試記錄，以便后續(xù)分析和追溯。如果測試在MVD水平進(jìn)行且出現(xiàn)超標(biāo)結(jié)果（OOS），不能歸因于測試錯(cuò)誤，該批次應(yīng)被視為不合格并予以拒收。

為確保測試過程的一致性和合規(guī)性，所有測試規(guī)程，包括上述提到的復(fù)驗(yàn)規(guī)程，都應(yīng)以書面的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）形式提前建立，并經(jīng)過公司質(zhì)量控制部門負(fù)責(zé)人的嚴(yán)格審查和批準(zhǔn)。

Q3：樣品的儲(chǔ)存和處理是否重要?
重要。儲(chǔ)存和處理步驟影響細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的能力。企業(yè)應(yīng)利用證明可檢測細(xì)菌內(nèi)毒素含量穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，制定用于細(xì)菌內(nèi)毒素分析的樣品儲(chǔ)存和處理（包括產(chǎn)品混合）程序。規(guī)程應(yīng)考慮到研究中使用的細(xì)菌內(nèi)毒素來源，同時(shí)牢記純化的細(xì)菌內(nèi)毒素與本地細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)可能不同。

Q4：在分析之前，用于內(nèi)毒素分析的成品樣品是否可以混合組成復(fù)合樣品?
是的。除了一些例外情況（見下文），成品單位可以混合組成復(fù)合樣品以進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素分析。復(fù)合樣品可以是水溶性藥品中一個(gè)生產(chǎn)批次中的整個(gè)單位或成品容器的部分等分樣品（等容積）。對于小容量注射劑（≤100ml），只要按比例調(diào)整最大有效稀釋倍數(shù)（MVD），樣品混合通常是可接受的，因?yàn)閷⒑�有有害水平�?xì)菌內(nèi)毒素的樣品和含有較低的、較小危害水平內(nèi)毒素的樣品一起稀釋具有降低數(shù)值的潛在可能性。

這種“調(diào)整后的MVD”是通過將單個(gè)樣本計(jì)算的MVD除以要混合的樣本總數(shù)而獲得的。FDA建議在每個(gè)復(fù)合樣品中不要混合多余3個(gè)樣品，以保持開始、中間和最后產(chǎn)品容器的樣品代表性。如果由于稀釋不夠，導(dǎo)致MVD降低，無法克服與產(chǎn)品有關(guān)的檢測干擾，則應(yīng)單獨(dú)檢測樣品。
 

醫(yī)療器械成品也可以混合成一個(gè)復(fù)合樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素分析。對醫(yī)療器械的檢測應(yīng)采用ISO 10993-1和ISO 10993-12中所述的淋洗法/洗脫法進(jìn)行測試，也適用于抑制和增強(qiáng)的目的。取樣可根據(jù)特殊情況進(jìn)行調(diào)整。在適當(dāng)?shù)南♂?富集后，可以獲得一個(gè)生產(chǎn)批次成品的復(fù)合樣品，這個(gè)混合的富集物應(yīng)該保存在對穩(wěn)定性有利的條件下，直到進(jìn)行平行樣測試。

FDA建議混合樣品應(yīng)該由對每個(gè)產(chǎn)品容器采用無菌工藝均等去除（最少30秒劇烈混合）后構(gòu)成的復(fù)合樣品。在這種情況下，假如混合樣品發(fā)生OOS情況，原始單個(gè)容器才可以進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。

有些類型的產(chǎn)品不能混合。兩個(gè)例子分別是，具有最初較低的MVD的藥品（參見上文“調(diào)整后的MVD"的討論）和混懸液產(chǎn)品，因?yàn)闃悠肪�分時(shí)，均性會(huì)面臨顯著差異。FDA也不建議對來自制造工藝的不同中控階段中控樣品進(jìn)行混合，因?yàn)檫@些物料的均勻性很難確認(rèn)。

隨著對熱原與細(xì)菌內(nèi)毒素檢測從取樣到處理的全面剖析，相信您已對這一關(guān)鍵質(zhì)量控制環(huán)節(jié)有了更為清晰的認(rèn)識(shí)，今日首發(fā)的第一期僅是系列文章的序幕，更多精彩內(nèi)容即將陸續(xù)呈現(xiàn)，誠邀您持續(xù)關(guān)注！