1,STR簡介:
STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復(fù)序列)基因位點(diǎn)由長度為3~7個堿基對的短串連重復(fù)序列組成 ,這些重復(fù)序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標(biāo)記,被稱為細(xì)胞的DNA指紋。
2,生產(chǎn)流程:
STR的生產(chǎn)流程主要包括,樣本收集,DNA抽提,毛細(xì)管凝膠電泳,數(shù)據(jù)導(dǎo)出和報告分析,其中比較重要的在于實(shí)驗(yàn)操作過程中的污染質(zhì)控,以及后續(xù)的報告解讀部分。對于需要做申報的公司,運(yùn)行數(shù)據(jù)的保存也是相當(dāng)重要的。
圖1,STR整體質(zhì)控流程
3,鑒定標(biāo)準(zhǔn)和位點(diǎn):
參考美國國家標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(American National Standard Institute,ANSI) 標(biāo)準(zhǔn):STR Loci (minimum set)TH01, TPOX, vWA, CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317, and D5S818 Gender marker Amelogenin,采用ATCC公布細(xì)胞鑒定金標(biāo)準(zhǔn)8位點(diǎn)+1個性別位點(diǎn),后續(xù)11個高度多態(tài)性位點(diǎn)輔佐判斷。
圖2,STR位點(diǎn)信息
4,完整的報告結(jié)果:
涵蓋一個陽性樣本質(zhì)控峰圖結(jié)果,數(shù)據(jù)庫比對表,標(biāo)準(zhǔn)的STR鑒定報告,毛細(xì)管凝膠電泳測序峰圖。其中,陽性質(zhì)控是比較重要的,能確保實(shí)驗(yàn)操作過程中的污染判別,排查實(shí)驗(yàn)操作人員或者環(huán)境中的污染結(jié)果。
圖3,完整的STR報告結(jié)果
5,質(zhì)量管理體系:
上海翼和STR嚴(yán)格依據(jù)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):ISO9001質(zhì)量管理體系,CMA司法鑒定標(biāo)準(zhǔn),建立了完整的質(zhì)量管理體系,從試劑耗材,到實(shí)驗(yàn)操作,數(shù)據(jù)監(jiān)控等方面監(jiān)控實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)出,確保數(shù)據(jù)的真實(shí)性及可靠性。
圖4,質(zhì)量管理體系
6,數(shù)據(jù)庫比對:
目前比較常用的數(shù)據(jù)庫包括,美國ATCC細(xì)胞庫,德國DSMZ細(xì)胞庫,日本JCRB細(xì)胞庫,日本Riken細(xì)胞庫,國家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺,EXPASY數(shù)據(jù)庫結(jié)果。翼和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),通過自動檢索軟件,對比德國DSMZ細(xì)胞數(shù)據(jù)庫結(jié)果,后續(xù)人員復(fù)核依照21位點(diǎn)結(jié)果,比對EXPASY數(shù)據(jù)庫,國家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺數(shù)據(jù)作為補(bǔ)充,復(fù)查數(shù)據(jù)結(jié)果。
圖5,數(shù)據(jù)庫比對結(jié)果
7,判讀標(biāo)準(zhǔn):
匹配度(EV值)計算公式:
=匹配度(%)
EV值≥1.0,細(xì)胞完全匹配參考細(xì)胞結(jié)果。
0.8≤EV值<1.0,細(xì)胞基本匹配參考細(xì)胞結(jié)果,基本匹配往往伴隨多等位的結(jié)果,需要參考21位點(diǎn)的結(jié)果來判讀是否是交叉污染,還是細(xì)胞微衛(wèi)星不穩(wěn)定導(dǎo)致的。
EV值<0.8,細(xì)胞不匹配。
8,增值服務(wù):
- 基于QPCR方法的4種屬鑒定結(jié)果,往往是人和小鼠STR鑒定體系檢測不到信號值的情況下,免費(fèi)幫客戶補(bǔ)測種屬。確保種屬來源正確,或者排查其他種屬源細(xì)胞污染的情況。4種屬涵蓋:人,小鼠,大鼠,倉鼠,4個物種。
- 10種屬鑒定結(jié)果:QPCR原理的種屬檢測服務(wù),后續(xù)根據(jù)客戶意愿決定是否需要排查4種屬外的其他物種結(jié)果。
- 英文報告:部分公司或者科研單位,尤其發(fā)表論文的老師,需要提供報告的英文報告用于發(fā)表論文?梢月(lián)系對應(yīng)銷售人員安排免費(fèi)出具英文報告結(jié)果。
- 為期至少一年的數(shù)據(jù)保留,和半年的客戶樣本保留。
9,STR應(yīng)用場景:
- 常見永生化細(xì)胞的鑒定,論文發(fā)表和公司細(xì)胞庫建庫。
- 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的交叉污染情況排查。
- 干細(xì)胞來源一致性比對。
- 自主的原代細(xì)胞建立,排查污染和原始數(shù)據(jù)保留。
10,參考文獻(xiàn):
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3,American Type Culture Collection Standards Development Organization Workgroup,A.S.N., Cell line misidentification: the beginning of the end. Nat Rev Cancer, 2010. 10(6):p. 441-8.
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