輪狀病毒，一種雙鏈無包膜的RNA病毒，主要引起5歲以下兒童嚴重腹瀉甚至死亡。目前，對該病毒感染尚無有效療法，多采用疫苗接種以預防和控制感染、降低重癥死亡率。活疫苗在防治方面取得進步，然而環(huán)境性腸病、營養(yǎng)不良、腸道微生物組等諸多因素的影響，疫苗效果仍存在較大差異。因此，需要不斷探索和改進，開發(fā)一款效果更佳、毒副作用更小的滅活疫苗。

北京大學協(xié)和醫(yī)學院的一個研究團隊于2023年在《Hum Vaccin Immunother》雜質發(fā)表了《Immunogenicity of inactivated rotavirus in rhesus monkey, and assessment of immunologic mechanisms》。

在該文中，作者從云南省一例腹瀉患兒的糞便中提取出輪狀病毒并傳代培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)16代后配制成1280、640和320 EU/mL三個濃度，通過離子交換層析、凝膠過濾等方法不斷純化濃縮，最后甲醛滅活為濃度98%的滅活輪狀病毒，在此基礎上制成滅活疫苗。將該疫苗接種在24只恒河猴中，分為2劑次免疫組和3劑次免疫組，每組內又分成四個亞組即對照組(0 EU)、160 EU、320 EU和640 EU。對免疫前和免疫后不同時間點，采集恒河猴的外周血進行抗體滴度檢測、ELISpot實驗和PBMC基因譜分析。同時， 利用法國Innopsys公司的Innoscan 300（現(xiàn)新型號InnoScan710）芯片掃描儀，檢測滅活疫苗的免疫應答引起的細胞因子反應。

對恒河猴血清不同時間點的檢測，研究人員發(fā)現(xiàn)不同免疫方案(2劑次和3劑次)的體液免疫結果中：1劑次IRV免疫后血清中和抗體、IgG抗體和IgA抗體滴度均較低.第2次注射后，3種抗體測定值都升高。而3劑次都接種的免疫組的免疫效果優(yōu)于2劑次免疫組。該結果說明，中和抗體、IgG和IgA水平與IRV免疫劑量相關，尤其是血清IgA抗體水平。

Innoscan 300分析細胞因子微陣列芯片的實驗結果表明，與免疫前的血液樣本相比，血清中TNFα水平下調了0.67倍、IL-6上調了1.21倍、IL-5上調了1.25倍、IL-4下調了0.67倍、IL-1β上調了1.02倍、IL-16下調了0.69倍、IL-15下調了0.87倍、IL-12p70上調了5.22倍、IFN-γ上調了1.93倍、GM-CSF下調了0.82倍（見圖1）。結合后續(xù)的GO分析和pathway分析，該結果說明，恒河猴首次免疫后5天，血清中IL-12p70和IFN-γ表達升高，IL-4和IL-16表達降低。IRV免疫可以刺激IL-12的表達和分泌，與輪狀病毒感染的效果相似。此外，輪狀病毒滅活疫苗免疫還能刺激活化T細胞增殖，激活CD4+ T細胞向Th0細胞分化，促進Th0細胞向Th1細胞分化，并分泌IFN-γ。分泌的細胞因子可直接對抗病毒，協(xié)助B細胞、CD8+ T淋巴細胞和巨噬細胞一起參與機體的免疫應答。

圖1 通過IFN-γ ELISPOT檢測和細胞因子陣列對輪狀病毒滅活疫苗接種后的細胞免疫分析
(a)最后一次免疫接種后第2周猴IFN-γ應答情況;(b)血漿細胞因子(TNF-α、IL-6、IL-5、IL-4、IL-1β、IL-16、IL-15、IL-12p70、IFN-γ和GM-CSF)通過innoscan 300定量分析(*:p<0. 05;**: p<0. 01;***: p<0.001(c) 疫苗接種后細胞因子(TNF-α， IL-6, IL-5, IL-4, IL-1β， IL-16, IL-15, IL-12p70, IFN-γ和GM-CSF)的倍數(shù)變化(*: p<0. 05)

基于上述結果，作者得出結論——輪狀病毒滅活疫苗免疫可誘導恒河猴產(chǎn)生體液和細胞免疫應答。中和抗體、IgG和IgA抗體水平與免疫劑量有關，尤其是血清IgA抗體。在恒河猴中進行的免疫原性評價結果為今后的臨床試驗提供了參考依據(jù)。

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Innopsys 成立于1999年�？偛课挥诜▏�，一直致力于生物醫(yī)學領域相關儀器和軟件的自主研發(fā)和生產(chǎn)。Innoscan系列掃描儀，采用先進的共聚焦PMT檢測器和多激光掃描光路，可以同時進行多通道熒光檢測。不僅有效降低了熒光光漂白現(xiàn)象以及信號損失，還可以有效縮短掃描時間。在基因組和蛋白組表達，基因突變，SNP檢測，CGH，細菌病毒檢測，腫瘤特異性標志篩查，病理組織篩查等方面都有非常廣泛的應用。

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