核酸藥物憑借其獨(dú)特的技術(shù)特點(diǎn)成為近年來新藥研發(fā)領(lǐng)域關(guān)注的焦點(diǎn)。核酸藥物包括小干擾RNA（siRNA）、反義寡核苷酸（ASO）、微小RNA（miRNA）、小激活RNA（saRNA）、信使RNA（mRNA）、適配體（aptamer）和抗體核酸偶聯(lián)藥物等，是基因治療的一種形式。其中siRNA藥物作為核酸藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，憑借基因沉默效率高、不良反應(yīng)可控、合成方便等優(yōu)點(diǎn)，在新藥研發(fā)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用，有望成為繼小分子和抗體藥物后最有希望開發(fā)出新藥的藥物。

一、SiRNA藥物作用機(jī)制

小干擾RNA（Small interfering RNA，siRNA）又稱為沉默RNA、短干擾RNA或非編碼RNA，是一類長(zhǎng)度在21~25bp的短雙鏈RNA分子。合成的siRNA通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞中，隨后少量的siRNA能夠從溶酶體中逃逸進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后，siRNA 被合并到 RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合物中（RNA-induced silencing complex，RISC），隨后siRNA分離成兩條單鏈：正義鏈（sense strand）和反義鏈（antisense strand），之后正義鏈被剪切在細(xì)胞質(zhì)中降解，而結(jié)合反義鏈的RISC被活化并且特異性地結(jié)合靶mRNA并切斷靶mRNA，引發(fā)靶mRNA的降解，從而阻斷靶蛋白的翻譯。
二、SiRNA藥物代謝研究策略

SiRNA藥物在體內(nèi)主要被血漿和組織中廣泛存在的核酸內(nèi)切酶和核酸外切酶所代謝，而不是通過肝臟的Ⅰ相和Ⅱ相代謝酶代謝。目前上市的siRNA藥物經(jīng)過結(jié)構(gòu)改造后，在血液循環(huán)中較少被代謝。通常絕大部分siRNA藥物被肝臟迅速攝取，小部分分布在其他組織，在肝臟或其他組織中經(jīng)由核酸酶代謝。對(duì)于siRNA藥物體內(nèi)代謝研究，通常是對(duì)動(dòng)物體內(nèi)的血漿、尿液、糞便及靶向組織（肝或腎等）進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒定和定量生物分析。

 然而在藥物早期篩選階段，化合物數(shù)量很多，動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)周期較長(zhǎng)，成本很高，很難通過體內(nèi)試驗(yàn)大批量進(jìn)行化合物篩選或結(jié)構(gòu)優(yōu)化。因此，合適的體外代謝研究對(duì)于siRNA藥物的早期篩選尤為重要。體外代謝研究具有通量大，實(shí)驗(yàn)周期短等優(yōu)勢(shì)，更有助于我們提高對(duì)于siRNA藥物的篩選速率。表1所示為常用的siRNA藥物的體外代謝研究體系。

表1 siRNA藥物的體外代謝研究體系
 

基質(zhì)	適用范圍
血清/血漿	評(píng)估siRNA藥物在血液循環(huán)系統(tǒng)中的代謝穩(wěn)定性情況，一般是體外siRNA藥物的必檢項(xiàng)。
肝S9	含有肝組織中大部分酶且容易獲取，一定程度上可以代替肝組織勻漿使用。
肝組織勻漿	酶體系比較全面，推薦用于siRNA藥物的體外篩選評(píng)價(jià)。
肝細(xì)胞	酶體系最為完善，適用于肝靶向的siRNA藥物代謝評(píng)價(jià)。
溶酶體	溶酶體是siRNA藥物通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞后的主要接觸的環(huán)境，具有豐富的酶體系，包括核酸酶和各種水解酶等，是siRNA代謝的重要場(chǎng)所，是研究siRNA藥物代謝穩(wěn)定性的高效實(shí)驗(yàn)體系。

三、相關(guān)產(chǎn)品

為滿足客戶對(duì)于siRNA藥物體外代謝研究的需求，IPHASE作為體外研究生物試劑引領(lǐng)者，憑借先進(jìn)的設(shè)備，專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)的經(jīng)驗(yàn)，開發(fā)出來多種用于siRNA藥物體外代謝研究的產(chǎn)品，助力廣大客戶進(jìn)行siRNA藥物早期篩選研究。
以下為部分產(chǎn)品列表
 

類別	分類
亞細(xì)胞組分	肝溶酶體
	酸化肝勻漿液
	肝/腸/腎/肺S9
	肝/腸/腎/肺微粒體
	肝/腸/腎/肺胞質(zhì)液
原代肝細(xì)胞	懸浮肝細(xì)胞
	貼壁肝細(xì)胞
專屬血漿	血漿穩(wěn)定性
	血漿蛋白結(jié)合

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