Edman 降解法是一種用于確定小肽和蛋白質的N-末端氨基酸序列的方法。這種方法是基于周期性地移除肽鏈N-末端的氨基酸并檢測該氨基酸的身份。這個過程可以重復進行,從而連續(xù)地確定多個氨基酸的順序。
Edman降解的大致步驟如下:
1.肽鍵選擇性標記:
首先,樣品與Edman試劑(酚酞異硫氰酸)反應,這會特異性地與肽的N-末端氨基酸形成一個環(huán)狀酞;苌。
2.酞;苌锏牧呀猓
經過酞;螅;被峥梢酝ㄟ^溫和的酸性條件(如三氟醋酸)從肽鏈上釋放出來,而不破壞肽鏈上的其它氨基酸。
3.氨基酸檢測:
釋放的酞酰化氨基酸可以通過色譜法進行分離和檢測,從而確定其身份。
4.重復過程:
剩余的肽再次與Edman試劑反應,釋放下一個N-末端的氨基酸,如此反復進行。
圖1
雖然這個方法在確定小肽的序列上很有用,但它有一些局限性。其中最大的局限性是它在降解過程中會出現(xiàn)效率損失,這通常使得連續(xù)降解超過15-20個氨基酸變得困難。對于較大的蛋白質,通常需要將其分解為較小的片段,然后對這些片段進行Edman降解。
近年來,由于質譜技術的進步,質譜成為了蛋白質序列和鑒定的主要工具,但在某些情境下,Edman降解仍然是一個有用的補充方法。