>> 深度空間蛋白質(zhì)組服務(wù)流程

01 簽單前溝通

02 LCM樣品類型確認(rèn)

03 形態(tài)學(xué)質(zhì)檢HE

04 正式實(shí)驗(yàn)
 

一、簽單前溝通

01 樣本類型

FFPE石蠟塊（建議1年內(nèi)，3年也有成功經(jīng)驗(yàn)）、OCT包埋塊、FFPE膜切片、OCT膜切片（切片前溝通，需要特殊膜貼片）、客戶自行通過(guò)LCM技術(shù)獲得的切割組織（提供載體信息），在FFPE和OCT之間更推薦FFPE。

注意：

⏩ 由于LCM操作時(shí)所用切片需要提前黏附在特殊的膜上，所以不接受普通載玻片上的OCT/FFPE切片，如果客戶自行制備膜切片，公司可以提供這種膜以及操作protocol。

⏩ 如果客戶自行通過(guò)LCM技術(shù)獲得的切割組織，請(qǐng)?zhí)崆皽贤ù_認(rèn)有關(guān)儀器、系統(tǒng)、膜材料等信息。這種組織會(huì)直接進(jìn)行蛋白質(zhì)提取、酶解、肽段質(zhì)檢檢測(cè)和分析。

⏩ 膜切片和包埋塊目標(biāo)截面的大小不得超過(guò)14 mm*45 mm。如下圖所示：

02 樣本背景信息

物種、器官、疾病、組織保存年限等。

03 預(yù)計(jì)LCM面積

根據(jù)LCM面積大小，建議3-5張連續(xù)切片，相同LCM區(qū)域合并。

04 樣品數(shù)量

樣品數(shù)、正式切片數(shù)。

05 ROl數(shù)量

客戶可根據(jù)形態(tài)學(xué)質(zhì)檢HE染色圖進(jìn)行第一次ROI圈選，確定反饋總ROI數(shù)量及每張切片的ROI數(shù)量。
 

二、形態(tài)學(xué)質(zhì)檢

分以下兩種情況：

1、FFPE石蠟塊和OCT包埋塊，實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行切片、HE染色并給出質(zhì)檢報(bào)告，客戶可通過(guò)HE看圖軟件確認(rèn)該切片是否有ROI所在區(qū)域，并進(jìn)行區(qū)域預(yù)圈選�？蛻敉�意并且實(shí)驗(yàn)室評(píng)估客戶圈選區(qū)域具有技術(shù)可行性后方可進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)；

2、FFPE/OCT膜切片，實(shí)驗(yàn)室選擇一張客戶送來(lái)的組織切片（玻片即可）進(jìn)行HE染色并給出質(zhì)檢報(bào)告，隨后與上述步驟相同。

注意：

⏩ 客戶的預(yù)圈選非常關(guān)鍵，實(shí)驗(yàn)室會(huì)根據(jù)預(yù)圈選結(jié)果判斷正式實(shí)驗(yàn)連續(xù)切片的數(shù)量（ROI內(nèi)細(xì)胞過(guò)少時(shí)會(huì)將連續(xù)切片上相同的ROI合并為一個(gè)ROI）。

⏩ 由于顯微切割有較低的失敗率，所以建議客戶在預(yù)圈選時(shí)多圈選幾個(gè)ROI以作備用。
 

圖片解釋：

No1：正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，單張切片的1號(hào)圈選區(qū)域取樣進(jìn)行蛋白檢測(cè)；

No2：正式實(shí)驗(yàn)中，若1號(hào)圈選區(qū)域無(wú)法進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)，則取2號(hào)圈選區(qū)域（備份樣本）進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)；

No3+No4：正式實(shí)驗(yàn)中，3號(hào)和4號(hào)圈選區(qū)域共同取樣合并后進(jìn)行蛋白檢測(cè)；

No5：正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，取三張連續(xù)膜片的5號(hào)圈選區(qū)域的組織合并后進(jìn)行蛋白檢測(cè)。
 

三、正式實(shí)驗(yàn)

01 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行連續(xù)切片，其中一片進(jìn)行HE染色，剩余切片制成膜切片

02 染色結(jié)果發(fā)送客戶

03 實(shí)驗(yàn)室在正式膜切片上根據(jù)客戶要求圈出ROI，并進(jìn)行LCM切割捕獲

04 收集到的切割組織進(jìn)行蛋白質(zhì)提取、酶解、質(zhì)譜檢測(cè)和分析