關(guān)于適體(Aptamer)篩選技術(shù)的相關(guān)問題介紹
瀏覽次數(shù):982 發(fā)布日期:2024-2-22
來源:卡梅德生物
1.核酸適配體相對于抗體有何優(yōu)勢?
適配體的篩選周期短、工作濃度低、批次差異性小、放大工藝簡單、成本低、穩(wěn)定易保存,并且可以常溫運輸,適合于毒素和低免疫原性抗原。
2. 磁珠方法篩選適配體,磁珠是一起加入到PCR體系中嗎?對PCR的有什么影響嗎?
一個簡單的判斷是如果加到PCR mix中,肉眼不可見磁珠的顏色,影響應(yīng)該是不大的,如果磁珠的量過多,肉眼可以看到mix中渾濁的顏色,那樣會對PCR過程產(chǎn)生抑制。
3. 一開始沒有什么引物二聚體,忽然從中間幾輪開始引物二聚體特別多,連初始文庫PCR出來,引物二聚體也是比較多,不知道錯在哪里了?
有可能后來出現(xiàn)了氣溶膠污染。
4. 核酸適配體有動力學特點嗎,比如高親和力的反應(yīng)速率比低親和力的反應(yīng)快?
有這個特點。但是篩選中要注意的是第一輪篩選的時候,基本都是單拷貝,即使是高親和力的也不一定保留下來,因為低親和力的還是更多的。所以第一輪篩選建議是盡量孵育時間長一點,讓能結(jié)合的盡量能結(jié)合并保留下來。
5. SELEX的難點在哪里?
主要是難在后期的鑒定。獲得文庫之后并不代表實驗已經(jīng)成功,還需要從文庫當中去找到真正能夠結(jié)合的單一序列。從測序、分析、挑選系列到合成,再到后面的鑒定要重復驗證,而這個過程是非常的漫長,并且后期的成本高于前期成本。
6. 按照做抗體的方法做核酸適配體的應(yīng)用為什么行不通?
核酸適配體結(jié)合到表面之后,它的構(gòu)象會發(fā)生改變,而這種變化就會導致它不能夠再像在溶液中一樣正確識別靶標分子。核酸適配體的結(jié)構(gòu)的柔性比蛋白質(zhì)更大,更容易發(fā)生結(jié)構(gòu)的變化。
7. 核酸適配體與靶標相互作用的作用力是什么?
適配體可以形成多種結(jié)構(gòu)形狀,例如發(fā)夾,凸起,假結(jié)和G-四鏈體。它們可通過氫鍵,靜電相互作用,疏水作用,π-π堆積,范德華力,或這些不同的力的組合與靶分子發(fā)生相互作用。