一、引言

 

在生物藥物研究領(lǐng)域，了解蛋白質(zhì)的定量信息對于理解細胞過程和疾病機制至關(guān)重要。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)定量方法需要使用標記分子，如熒光染料或同位素標記，來標記蛋白質(zhì)樣品。然而，這些標記方法可能會引入偏差或干擾，限制了其在生物藥物研究中的應(yīng)用。近年來，無標記定量技術(shù)——label-free quantification應(yīng)運而生，為研究人員提供了一種更準確、更靈活的蛋白質(zhì)定量方法。

二、無標記定量的原理

 

無標記定量技術(shù)基于質(zhì)譜分析原理，通過測量蛋白質(zhì)樣品中的肽段特征峰的強度來推斷蛋白質(zhì)的相對豐度。這種方法不需要使用任何標記分子，因此避免了標記引入的偏差和干擾。無標記定量技術(shù)主要包括兩種方法：基于譜庫的定量和基于峰面積的定量。

1.基于譜庫的定量

 

基于譜庫的定量方法是通過與已知蛋白質(zhì)譜圖進行比對，來確定待測樣品中蛋白質(zhì)的相對豐度。這種方法需要建立一個包含已知蛋白質(zhì)譜圖的數(shù)據(jù)庫，并將待測樣品的譜圖與數(shù)據(jù)庫進行比對。通過比對分析，可以確定待測樣品中蛋白質(zhì)的相對豐度。

2.基于峰面積的定量

 

基于峰面積的定量方法是通過測量蛋白質(zhì)樣品中肽段特征峰的面積來推斷蛋白質(zhì)的相對豐度。這種方法利用質(zhì)譜儀測量肽段特征峰的強度，并計算峰面積。通過比較不同樣品中肽段特征峰的面積，可以確定蛋白質(zhì)的相對豐度。

三、無標記定量的優(yōu)勢

 

相比傳統(tǒng)的標記定量方法，無標記定量具有以下幾個優(yōu)勢：

1. 高靈敏度

 

無標記定量技術(shù)利用質(zhì)譜分析，具有高靈敏度和高分辨率的特點。它可以檢測到低豐度的蛋白質(zhì)，并提供準確的定量結(jié)果。

2. 高準確性

 

無標記定量技術(shù)避免了標記引入的偏差和干擾，提供了更準確的定量結(jié)果。它可以準確地測量蛋白質(zhì)的相對豐度，幫助研究人員更好地理解細胞過程和疾病機制。

3. 靈活性

 

無標記定量技術(shù)不需要使用特定的標記分子，具有更大的靈活性。研究人員可以根據(jù)實驗需求選擇適合的質(zhì)譜分析方法，從而實現(xiàn)更精確的定量。

四、無標記定量的應(yīng)用

 

無標記定量技術(shù)在生物藥物研究中有廣泛的應(yīng)用。以下是一些常見的應(yīng)用領(lǐng)域：

1. 蛋白質(zhì)組學研究

 

無標記定量技術(shù)可以用于研究蛋白質(zhì)組學，幫助研究人員了解細胞中蛋白質(zhì)的表達和調(diào)控。通過比較不同樣品中蛋白質(zhì)的相對豐度，可以發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)標志物，為疾病的早期診斷和治療提供依據(jù)。

2. 藥物研發(fā)

 

無標記定量技術(shù)可以用于藥物研發(fā)過程中的藥效評估和藥物代謝研究。通過測量藥物在體內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合情況和代謝產(chǎn)物的相對豐度，可以評估藥物的療效和安全性。

3. 生物標志物發(fā)現(xiàn)

 

無標記定量技術(shù)可以用于生物標志物的發(fā)現(xiàn)和驗證。通過比較疾病組織和正常組織中蛋白質(zhì)的相對豐度，可以發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)標志物，為疾病的診斷和治療提供新的靶點。

五、結(jié)論

 

無標記定量技術(shù)作為一種新興的蛋白質(zhì)定量方法，在生物藥物研究中具有廣泛的應(yīng)用前景。它不僅具有高靈敏度和高準確性，還具有靈活性和可靠性。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和改進，無標記定量技術(shù)將為生物藥物研究提供更多的可能性，推動科學的進步和創(chuàng)新。

圖1