桔青霉素是青霉屬、曲霉屬、紅曲霉屬中的絲狀霉菌代謝產(chǎn)生的一種真菌毒素，有研究表明，桔青霉素可造成人和動(dòng)物腎臟、肝臟、腸道和生殖系統(tǒng)的損傷，甚至還可以導(dǎo)致畸形、腫瘤，誘發(fā)突變^[1,2,3]。《中國(guó)藥典》9305中藥中真菌毒素測(cè)定指導(dǎo) 原則（第一次）征求稿^[4]中提到中藥材在種植、加工、儲(chǔ)存及流通等過程中存在被真菌及其產(chǎn)生的毒素污染的風(fēng)險(xiǎn)，為實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥中真菌毒素的準(zhǔn)確測(cè)定，制定本指導(dǎo)原則。除已收錄入2020年版《中國(guó)藥典》2351真菌毒素測(cè)定法中的7類11種真菌毒素測(cè)定法外，該指導(dǎo)原則其中一項(xiàng)，增訂桔青毒素高效液相色譜法與液相色譜串聯(lián)-質(zhì)譜法兩種檢測(cè)方法。
 
SCIEX已針對(duì)桔青毒素高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法建立液質(zhì)方法和前處理方法，為中藥中桔青毒素檢測(cè)提供參考。
 

實(shí)驗(yàn)方法特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)
·     本方法采用SCIEX Triple Quad^™ 5500+系統(tǒng)，采用桔青霉素免疫親和柱對(duì)中藥進(jìn)行前處理，結(jié)合Phenomenex Luna Omega Polar C18色譜柱，建立8 min 色譜梯度，實(shí)現(xiàn)高通量定量分析。滿足藥典對(duì)回收率的要求；不同濃度回收率結(jié)果一致，且儀器的重復(fù)性好；前處理流程簡(jiǎn)單易操作。
   
·     空白溶劑中兩個(gè)MRM離子通道均無干擾，方法專屬性好，特異性高，儀器靈敏度高。該色譜條件下，色譜峰峰形良好。
     
·     不同濃度的峰面積及線性回歸方程見圖3：0.02 ~20 ng/mL的濃度范圍內(nèi)，該方法線性關(guān)系良好。
    
·     6 針樣品 (圖4) 連續(xù)采集，精密度（RSD）遠(yuǎn)滿足方法學(xué)中對(duì)重復(fù)性要求，儀器和方法的重現(xiàn)性好。
    
·     三個(gè)不同濃度的提取回收率在91-105%之間，9份提取回收率結(jié)果RSD為5.30%，不同濃度的提取回收率結(jié)果基本一致，且滿足方法學(xué)要求。
  
表1. 3個(gè)不同濃度的提取回收率結(jié)果  
 
結(jié)論
本方法采用桔青霉素免疫親和柱對(duì)中藥中的桔青霉素進(jìn)行提取，使用本土化SCIEX Triple Quad^™ 5500+系統(tǒng)進(jìn)行定量。
·      該方法中空白溶劑無干擾，專屬性好，特異性高；
·      儀器靈敏度高；
·      線性范圍寬，線性關(guān)系良好；
·      儀器和方法的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好； 
·      8分鐘梯度方法，檢測(cè)通量高。
·      前處理流程簡(jiǎn)單，易操作。
該方案中包含的液質(zhì)條件和前處理方法，為中藥中桔青霉素的定量提供參考。
 

參 考 文 獻(xiàn)
1. Frank HK. Citrinin. Z Ernaehrungswiss, 1992,31(3):164
2. Blanc PJ, Loret MO, Goma G. Production of citrinin by various species of Monasucus. Biotechnol Lett, 1995,17(3):291
3. LI Yan, QIU Feng, etc. LC-MS/MS determination of citrinin in traditional Chinese Medicines. Chin J Pharm Anal 2011,31(9)
4. 附件 2：9305 中藥中真菌毒素測(cè)定指導(dǎo)原則（第一次）