24小時(shí)長效培養(yǎng)PBMC保障細(xì)胞高活性
瀏覽次數(shù):1150 發(fā)布日期:2023-11-16
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一、PBMC細(xì)胞簡介
外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,來源于骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC),
通常主要包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與外周血其他細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞的比重在1.092左右,單個(gè)核細(xì)胞的比重為1.075-1.090,血小板為1.030-1.035。因此利用一種介于1.075-1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,可將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離。
淋巴細(xì)胞又包括T淋巴細(xì)胞,B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞。其中T淋巴細(xì)胞是比例最多的淋巴細(xì)胞類型,在胸腺中發(fā)育成熟,主要功能就是執(zhí)行人體的細(xì)胞免疫功能,在人體的免疫監(jiān)視中發(fā)揮著重要的作用。B淋巴細(xì)胞屬于人體的執(zhí)行體液免疫功能的細(xì)胞,B淋巴細(xì)胞受抗原刺激以后,能夠發(fā)育成熟為漿細(xì)胞,可以分泌各種抗體,發(fā)揮體液免疫功能NK細(xì)胞是人體非特異性免疫細(xì)胞,也在免疫監(jiān)視中發(fā)揮著重要作用。
單核細(xì)胞屬于白細(xì)胞的一種,從血液中逸出到組織中就變成了吞噬細(xì)胞,也稱為巨噬細(xì)胞,在人體的非特異性免疫功能中發(fā)揮著重要的作用。
二、PBMC細(xì)胞應(yīng)用
PBMC是免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分,因此在免疫學(xué)、傳染病、惡性腫瘤、疫苗研發(fā)、移植治療、個(gè)性化醫(yī)學(xué)和毒理學(xué)領(lǐng)域均作為最基礎(chǔ)的試驗(yàn)原料被廣泛應(yīng)用。例如在腫瘤免疫藥物研發(fā)中常用于抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)、T細(xì)胞激活或抑制、CMV Recall、Treg抑制及PBMC構(gòu)建人源化小鼠等體外試驗(yàn),也可用作PBMC-腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng),突破免疫體外殺傷研究的壁壘。
以ADCC試驗(yàn)為例,PBMC在其中起主要作用。抗體依賴性細(xì)胞毒性試驗(yàn),是依靠抗體介導(dǎo)殺傷細(xì)胞來殺傷靶細(xì)胞。具體過程可理解為:抗體的Fab段結(jié)合在靶細(xì)胞抗原表位上?贵w的Fc段與NK細(xì)胞(因NK細(xì)胞是能發(fā)揮ADCC作用的主要細(xì)胞,故以此舉例)表面的FcR結(jié)合,從而NK細(xì)胞活化,穿孔素、顆粒酶被釋放。穿孔素、顆粒酶從靶細(xì)胞膜上形成的“孔道”進(jìn)入胞內(nèi),通過激活凋亡相關(guān)的酶使靶細(xì)胞凋亡。在以上過程中,為了使效應(yīng)細(xì)胞釋放的細(xì)胞毒物質(zhì)充分作用于靶細(xì)胞,良好的效應(yīng)細(xì)胞(如新鮮的PBMC)供給在ADCC的研究中是必不可少的。另外,ADCC也常用來評估藥物研發(fā)中抗體的活性有無及強(qiáng)弱,因此一個(gè)高質(zhì)量的PBMC產(chǎn)品用作效應(yīng)細(xì)胞尤為重要。
三、相關(guān)評估
技術(shù)人員以
0和24時(shí)培養(yǎng)為檢測點(diǎn),測定不同種屬下的細(xì)胞活率,結(jié)果表明經(jīng)長時(shí)培養(yǎng)后,細(xì)胞活率仍可達(dá)到75%以上,極好地滿足客戶需求。
人凍存PBMC·24小時(shí)培養(yǎng)活率
猴凍存PBMC·24小時(shí)培養(yǎng)活率
多種屬PBMC均經(jīng)過流式細(xì)胞儀利用特定抗體對
T細(xì)胞和B細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞組分進(jìn)行占比評估,方便客戶直觀地了解常見細(xì)胞占比。
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