冠狀病毒是有包膜的單鏈RNA病毒，其刺突蛋白（S蛋白）可與動(dòng)物身體上的受體細(xì)胞結(jié)合，繼而入侵到動(dòng)物體內(nèi)。豬腸道冠狀病毒（PECs）是商業(yè)豬群中高發(fā)的一類(lèi)冠狀病毒，主要包括：流行性腹瀉病毒（PEDV）、傳染性腸胃炎病毒（TGEV）和豬三角冠狀病毒（PDCoV）。目前PECs主要通過(guò)RT-PCR、免疫組化和病毒中和檢測(cè)等方法進(jìn)行鑒別和診斷。盡管PECs在致病性上存在差異，但它們?cè)谂R床和組織病理學(xué)上都難以區(qū)分，因此利用其遺傳特性開(kāi)發(fā)新的快速檢測(cè)手段至關(guān)重要。在單個(gè)反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)標(biāo)記物，對(duì)于快速識(shí)別和分類(lèi)相關(guān)病原體是一種嘗試手段。S蛋白氨基末端S1亞基的受體結(jié)合域是血清學(xué)診斷的高敏感性和特異性抗原靶點(diǎn)，本研究則描述了一種基于病毒特異性重組S1蛋白的ELISA樣多重平面免疫分析方法，蛋白點(diǎn)印在微孔板底部，同時(shí)檢測(cè)血清樣本中的PEDV、TGEV和PDCoV。工作原理與ELISA相似，樣本結(jié)合強(qiáng)度與陣列中特定病毒抗原靶標(biāo)的抗體水平相關(guān)。
 

該文章發(fā)表在Journal of Immunological Methods雜志，作者來(lái)自于美國(guó)愛(ài)荷華州立大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院。ELISA對(duì)多個(gè)病原體的抗體水平檢測(cè)涉及到多個(gè)工作流程，不僅耗時(shí)而且也增加了成本和錯(cuò)誤風(fēng)險(xiǎn)。使用多重平面免疫分析法，可同時(shí)對(duì)三種主要的PECs（PEDV、TGEV和PDCoV）進(jìn)行血清學(xué)診斷。微陣列中樣本矩陣的獨(dú)特設(shè)計(jì)，同比色法相比，不僅減少了試劑消耗也降低了檢測(cè)成本，而且更快速、更高靈敏度。具體方法：S1蛋白的結(jié)構(gòu)域編碼區(qū)在質(zhì)粒載體和HEK293細(xì)胞中表達(dá)，進(jìn)行純化后，分別使用SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行表達(dá)結(jié)果驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)中480份血清樣本批次接種PEDV、TGEV（Purdue和Miller亞型）和PDCoV的第（-7、0、7、14、21、28、35和42）天，在微孔板中進(jìn)行孵育，隨后加入特異性識(shí)別IgG的酶標(biāo)抗體，以及底物四甲基聯(lián)苯胺（TMB）進(jìn)行顯色，并使用德國(guó)Sensovation的多因子檢測(cè)芯片掃描儀進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取和分析，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流程見(jiàn)圖1。

結(jié)果顯示：PEDV S1的診斷敏感性為92%（44/48陽(yáng)性），TGEV S1為100%（95/95陽(yáng)性），PDCoV S1為98%（47/48陽(yáng)性），見(jiàn)圖2。

結(jié)果表明，AgroDiag PEC多重免疫分析法是一種有效、可靠檢測(cè)PECs的血清學(xué)診斷方法。

Sensovation 成立于2000年�？偛课挥诘聡�(guó)，一直致力于研發(fā)和生產(chǎn)科學(xué)級(jí)成像設(shè)備。Sensovation多因子檢測(cè)芯片掃描儀可對(duì)兼容96孔板和各種生物芯片，也可與自動(dòng)進(jìn)樣裝置和液體處理工作站進(jìn)行整合。在基因組和蛋白組表達(dá)，基因突變，病毒微生物檢測(cè)，腫瘤特異性標(biāo)志物篩查，自身免疫抗體分析等領(lǐng)域都有非常廣泛的應(yīng)用。

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