當(dāng)通過組學(xué)、文獻(xiàn)、芯片等數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)某個(gè)基因可能在某個(gè)生物學(xué)過程中發(fā)揮功能時(shí)，那么下一步該如何驗(yàn)證呢？這是大部分的科研僧都會(huì)遇到的問題，其中具體的方式有很多種，一般都需要根據(jù)實(shí)際情況分析，但是常規(guī)基礎(chǔ)思路可以給大家分享一下，大部分的驗(yàn)證功能都是可以通過此方案進(jìn)行，若本基因有一些特殊作用可以相對(duì)應(yīng)添加特殊實(shí)驗(yàn)，比如油紅O染色、鬼筆環(huán)肽染色、活死染色等。
 
一、實(shí)驗(yàn)材料： 疾病對(duì)應(yīng)的細(xì)胞系（或者是原代細(xì)胞），預(yù)算充足情況下可以選擇2種細(xì)胞系，暫定為：A和B細(xì)胞
二、實(shí)驗(yàn)方案：敲低兩種細(xì)胞的目的基因1、過表達(dá)兩種細(xì)胞的目的基因1（若是miRNA可以使用mimics、inhibitor）
三、干擾片段篩選：2種細(xì)胞都需要篩選（當(dāng)用mimics和inhibitor時(shí)也需要初步篩選表達(dá)效果）
目的基因1干擾片段篩選：針對(duì)目的基因1設(shè)計(jì)并合成3條siRNA及NC，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，QPCR篩選出干擾效果最好的片段進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)； 
四、實(shí)驗(yàn)分組：A或B細(xì)胞

• A
• A+siRNA NC對(duì)照組
• A+siRNA目的基因1干擾
• A+過表達(dá)目標(biāo)基因1 
• A+過表達(dá)空載
• 抑制劑處理濃度1

五、檢測(cè)項(xiàng)目：

• 細(xì)胞增殖或者細(xì)胞毒性檢測(cè)（CCK法/MMT），
• 流式檢測(cè)細(xì)胞周期，
• 流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡，
• 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（transwell），遷移、劃痕
• WB檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)通路中蛋白的表達(dá)變化，
• QPCR檢測(cè)信號(hào)通路中基因的表達(dá)， 
• 免疫熒光檢測(cè)下游信號(hào)通路蛋白
• 流式多色檢測(cè)某些marker指標(biāo)
• Coip檢測(cè)A和B蛋白是否結(jié)合
• 雙熒光素酶檢測(cè)A和B是否結(jié)合
• 油紅O染色
• 生化檢測(cè)：SOD，CAT等
• 透射電鏡

 
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（上述檢測(cè)類似結(jié)果，非本實(shí)驗(yàn)的實(shí)際結(jié)果）

• 細(xì)胞增殖（CCK8）/MMT

 

• 流式檢測(cè)細(xì)胞周期

 

• 流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡

 

• 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（transwell），遷移、劃痕

• WB檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)通路中蛋白的表達(dá)變化

• QPCR檢測(cè)信號(hào)通路中基因的表達(dá)

• 免疫熒光檢測(cè)下游信號(hào)通路蛋白

 

• 油紅O染色