1.什么是單克隆源性鑒定
單克隆源性即對生產(chǎn)的抗體進行溯源，確定是由單一細胞克隆產(chǎn)生的高度均一的抗體。
 
2.單克隆源性鑒定目的
近年來重組蛋白藥物在治療疾病，尤其是腫瘤方面有重大應(yīng)用，而重組蛋白藥物大多數(shù)由哺乳動物的CHO細胞表達產(chǎn)生。藥物評審單位要求研發(fā)企業(yè)出具該藥物所使用細胞的單克隆源性，因此驗證工程細胞的單克隆源性是保證蛋白藥物一致性的重要手段。
 
3.單克隆獲取方法
克隆性被認為可以減少細胞庫的異質(zhì)性，常用的單克隆獲取方法，如：有限稀釋法、ClonePix、流式細胞熒光分選技術(shù)、單克隆挑選新技術(shù)等。
3.1有限稀釋法（limiting dilution cloning, LDC）
有限稀釋法是一種常用的克隆方法，要求鋪板密度小于0.5cell/well，該方法的優(yōu)點是操作簡單，對設(shè)備的需求比較低，缺點是耗時較長，效率低，并且對人工依賴性比較高，受實驗操作人員，實驗環(huán)境、條件等因素的影響易產(chǎn)生不同結(jié)果。
3.2 ClonePix法
ClonePix是一種高通量的單克隆篩選設(shè)備，該方法人工干預(yù)少，通量大、效率高，篩選的準確性高。但相比于有限稀釋法，ClonePix法篩選的單克隆培養(yǎng)基和后期的生產(chǎn)工藝培養(yǎng)基差距更大，有限稀釋法的克隆在孔板的表現(xiàn)更接近于生產(chǎn)時的狀態(tài)。
3.3流式細胞熒光分選技術(shù)（FACS）
流式細胞熒光分選技術(shù)（FACS）是根據(jù)細胞大小、熒光染料和細胞表面marker等因素挑選出所需要的單細胞。該方法的優(yōu)點是單克隆形成率很高，缺點是需要通過條件優(yōu)化，使挑選的細胞與孔板的孔一一對應(yīng)，流式細胞儀、細胞的形態(tài)及狀態(tài)對分離效果有影響。
3.4單克隆挑選新技術(shù)
目前市場上有多種單克隆篩選設(shè)備可選擇，如單細胞打印、Solentim VIPS等，可提高效率，減少對人工的依賴。目前獲得單克隆基本上是以上方法的反復(fù)聯(lián)用和使用。
 
4.熒光原位雜交技術(shù)鑒定單克隆源性
利用熒光原位雜交技術(shù)來檢測細胞是否來源單一，其結(jié)果可視化，具有說服力。
熒光原位雜交技術(shù)是利用熒光檢測系統(tǒng)對DNA進行定性、定量或相對定位分析的技術(shù)，其基本原理是根據(jù)DNA序列的互補性，用已知的熒光素、生物素或地高辛標記的核酸探針與待檢測樣本的DNA進行雜交，形成可檢測的雙鏈核酸雜交。
   
5.熒光原位雜交技術(shù)優(yōu)勢
熒光原位雜交法具有其他雜交方法沒有的優(yōu)勢：
（1）FISH是非放射性元素標記，更加安全；
（2）FISH的實驗周期短，可同時檢測多種序列；
（3）FISH技術(shù)因其多次免疫化學(xué)反應(yīng)增強了雜交信號，靈敏度與放射性探針相當。
 
6.卡梅德生物能夠為客戶提供高質(zhì)量的單克隆源性鑒定服務(wù)
卡梅德生物（KMD Bioscience）多年來致力于細胞生物學(xué)技術(shù)研究，我們擁有經(jīng)驗豐富的科研專家團隊、實驗技能精湛的實驗團隊、完善的細胞培養(yǎng)平臺以及完備的實驗儀器和實驗條件，搭建了完備的熒光原位雜交技術(shù)服務(wù)平臺，積累了大量的成功經(jīng)驗。憑借扎實的專業(yè)技術(shù)，我們可以定制化提供從探針設(shè)計到細胞單克隆源性鑒定全套服務(wù)，力求以高效率、低成本效益的方式為客戶解決問題。
 
 
7.熒光原位雜服務(wù)交流程介紹
卡梅德生物可以提供熒光原位雜交服務(wù)，主要技術(shù)流程如下：探針設(shè)計與合成，樣本處理，原位雜交實驗，成像拍照，結(jié)果分析與項目報告。 7.1探針設(shè)計和合成
7.1.1即用型探針可以直接雜交，非即用型探針需要與與雜交液按 1：1：1：50 比例稀釋，85℃變性 3 分鐘，37℃平衡 5 分鐘。
 
7.2樣本處理
7.2.1脫蠟復(fù)水，將石蠟切片浸入二甲苯中脫蠟，2 次，每次 10 分鐘；
7.2.2片子依次過 100%、85%、75%乙醇，各 3 分鐘，PBS 3 分鐘；
7.2.3 片子加胃蛋白酶消化液，37℃消化 15-30 分鐘，PBS 洗滌 2 次，每次 3 分鐘；
7.2.4預(yù)雜交：提前 30 分鐘從冰箱中取出雜交液恢復(fù)至室溫，滴加雜交液，雜交儀中 55℃孵育 1 小時。
 
7.3原位雜交實驗
7.3.1取出預(yù)雜交好的片子，去除多余液體，將探針滴加于片子上，完全覆蓋組織， 放于雜交儀中 37℃雜交過夜；  
7.3.2片子入 2×SSC（0.1％NP-40）中洗滌 3 次，每次 5 min；
7.3.3 滴加 20ul DAPI-Antifade Solution 蓋玻片封片，避光孵育 20min。
 
7.4成像拍照
利用本熒光原位雜交技術(shù)CHO細胞實驗結(jié)果拍照：  
7.5結(jié)果分析與項目報告
 
卡梅德生物交付：剩余的探針、切片以及樣品，原始雜交顯色成像照片，詳細的實驗報告（包含完整的實驗流程及結(jié)果分析）。
 
總之，鑒定單克隆源性是重組蛋白藥物質(zhì)量一致性的前提和保證，在藥物申報時缺乏單克隆源性鑒定的證據(jù)會導(dǎo)致無法通過�？�梅德生物致力于單克隆源性鑒定多年，利用熒光原位雜交技術(shù)，可為廣大藥企藥物申報環(huán)節(jié)提供關(guān)鍵的數(shù)據(jù)結(jié)果�？�梅德生物可以檢測100-200個細胞，服務(wù)周期短，助力于企業(yè)藥物申報之路。