1.天然蛋白純化概念
蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛，是一項(xiàng)重要的操作技術(shù)。一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì)，為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì)，必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。
卡梅德生物可以提供有/無(wú)標(biāo)簽重組蛋白進(jìn)行純化，同時(shí)也可以進(jìn)行組織液，唾液，腸液，動(dòng)物或者人的血清，甚至是一些動(dòng)物組織等進(jìn)行天然蛋白的純化分離。
2.天然蛋白純化方法
根據(jù)蛋白的特性，一般可以有以下5種純化方法，親和色譜、離子交換、分子篩、疏水色譜、HPLC，使用先進(jìn)的AKTA純化系統(tǒng)和多種規(guī)格的預(yù)裝純化柱來純化不同來源的重組蛋白或天然蛋白。 3.不同分子天然蛋白分離純化
3.1天然大分子蛋白分離純化
根據(jù)客戶需要純化的目的蛋白的理化性質(zhì)，選用適當(dāng)孔徑的分子篩分離純化，再根據(jù)樣品緩沖液的PH值選用合適的陰、陽(yáng)離子吸附柱以及HLPC，鑒定并收取相應(yīng)洗脫峰。
3.2天然小分子蛋白分離純化
先通過分子篩多層級(jí)分離過濾除去大分子雜質(zhì)，再使用大孔樹脂或反向樹脂純化小分子化合物，進(jìn)一步通過HPLC和MS對(duì)小分子蛋白進(jìn)行鑒定。
3.3混合未知蛋白樣品分離純化
根據(jù)客戶需分離的目的蛋白特性制定相應(yīng)的方案進(jìn)行分離純化，最后會(huì)通過質(zhì)譜鑒定、活性鑒定等多種方案確認(rèn)分離產(chǎn)物。
 
4.天然蛋白純化步驟
天然蛋白分離純化一般程序可以分為前處理、粗分離、細(xì)分離三步。
4.1前處理
分離純化某種蛋白質(zhì)，首先要把蛋白質(zhì)從原來的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來并保持原來的天然狀態(tài)，不丟失生物活性。因此，動(dòng)物材料應(yīng)先剔除結(jié)締組織和脂肪組織，然后根據(jù)不同的情況，選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⒔M織和細(xì)胞破碎；植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的。
 
4.2粗分離
當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液（有時(shí)還雜有核酸、多糖之類）獲得后，一般使用用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、處理量大，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白溶液。
4.3細(xì)分離
一般蛋白經(jīng)過粗分離后，體積較小，大部分雜質(zhì)蛋白已經(jīng)被除去。使用疏水層析、離子交換層析、分子篩分離以及以及親和層析等方法進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)分離。
4.3.1純化前檢測(cè)與純化小試
首先進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)蛋白情況，后通過摸索條件（緩沖液、填料、洗脫條件、鹽梯度等條件），制定出離子交換層析方案。
（1）菌液經(jīng)過離心過濾，使用Akta purifier儀器，配合G25脫鹽柱進(jìn)行上樣洗脫，達(dá)到純化的目的。
  （2）G25脫鹽后的樣品進(jìn)行SPFF(瓊脂糖凝膠)層析柱分離，樣品離心過膜后，經(jīng)過平衡，上樣，洗脫步驟純化。  

4.3.2蛋白純化及檢測(cè)
蛋白純化小試條件摸索完成后，可以根據(jù)小試條件放大進(jìn)行大量純化，SDS-PAGE（純度驗(yàn)證），紫外吸收、BCA法等進(jìn)行濃度檢測(cè)。