脂質(zhì)納米粒LNPs作為mRNA遞送的首先載體。LNPs主要通過陽離子的磷脂材料與其他輔助磷脂完成顆粒的構(gòu)建,通過RNA所帶的負(fù)電與陽離子磷脂的正電相互吸附,可實(shí)現(xiàn)較高的包載效果,并且在體內(nèi)由低密度脂蛋白介導(dǎo)的胞吞機(jī)制可使納米粒子成功被細(xì)胞攝取,實(shí)現(xiàn)良好的細(xì)胞攝取效果。
R-SHM處方工藝篩選芯片盒,使用次數(shù)根據(jù)不同的測(cè)試條件可以>30次*或>100次**。
備注:
*采用處方BNT空白LNP處方測(cè)試,測(cè)試條件為1:3,總流速12ml/min,總體積為10ml,粒徑和PDI能保持一致。
**采用純乙醇測(cè)試,測(cè)試條件為1:1,總流速20ml/min,總體積為10ml,芯片無泄露。采用BNT處方,粒徑和PDI能與新芯片保持一致。
流速范圍:1ml/min-20ml/min。
R-SHM芯片除酶除熱原流程
試劑
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75%乙醇,
0.5MNaOH 溶液,
無水乙醇,
DEPC 水
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1、芯片使用前清洗
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01
75%乙醇清洗
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用 2 支 2.5ml 注射器各取 2ml 75%乙醇,
調(diào)用“清洗程序"的方法
(兩相比例=1:1,總體積 4ml,流速 12ml/min)
取 15ml 離心管掛上機(jī)器左邊的收集管卡槽
點(diǎn)擊軟件運(yùn)行。
02
0.5MNaOH 溶液清洗
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用 2 支 2.5ml 注射器,
各取 0.5MNaOH 溶液,
重復(fù)上述操作條件清洗。
清洗后靜置 1小時(shí)。
03
殘余液體排空
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用 2 支 2.5ml 注射器,
抽滿空氣,
插入芯片,
重復(fù)上述操作條件排空。
04
無水乙醇—DEPC水
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用 2 支 5ml 注射器,
各取無水乙醇,DEPC 水 5ml,
軟件設(shè)置
(兩相比例=1:1,總體積10ml,流速 12ml/min),
具體操作如上,重復(fù)清洗 3 次,
排空殘余液體。
清洗步驟:
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無水乙醇-DEPC 水清洗→
75%乙醇清洗→
0.5MNaOH 溶液清洗→
殘余液體排空→
無水乙醇-DEPC 水清洗3次→
殘余液體排空
注意:溶液的抽取體積應(yīng)大于軟件設(shè)置體積。