繼2022年12月7日國(guó)務(wù)院聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制公布《關(guān)于進(jìn)一步優(yōu)化落實(shí)新冠肺炎疫情防控措施的通知》之后，國(guó)內(nèi)陸陸續(xù)續(xù)全面放開(kāi)。但是，放開(kāi)并不是說(shuō)新冠病毒消失了，只是它的毒性減小，而傳染性仍然很高。從12月份開(kāi)始，中國(guó)一大波人感染新冠，一時(shí)間網(wǎng)上全是“陽(yáng)陽(yáng)陽(yáng)”的消息，年輕人發(fā)燒、頭痛、拉肚子……，還有不少老年人本身就有基礎(chǔ)性疾病，感染新冠后導(dǎo)致去世。這時(shí)，降低住院/死亡風(fēng)險(xiǎn)88%的輝瑞新冠特效藥—Paxlovid需求激增，價(jià)格一度飆升到2萬(wàn)/盒，即使這樣依然是“一藥難求”。因此，很多國(guó)家的藥企去爭(zhēng)相獲取輝瑞仿制藥的授權(quán)。印度作為仿制藥大國(guó),作為“世界藥房”必然在輝瑞授權(quán)的仿制藥生產(chǎn)國(guó)中。于是，輝瑞公司治療新冠病毒肺炎的“神藥”—Paxlovid和印度仿版藥物成為了最近市面上最緊俏最熱門(mén)的的藥物。

 

        

      然而即使大家千方百計(jì)買(mǎi)到了，但如何鑒定真?zhèn)斡殖闪藗�(gè)難題。一般來(lái)說(shuō)，檢測(cè)藥物成分從而鑒定藥物的真?zhèn)问紫葧?huì)選用液質(zhì)聯(lián)用儀（LC-MS），原理是在氣態(tài)中根據(jù)樣本質(zhì)荷比的不同將其分離并進(jìn)行檢測(cè)。但LC/MS-MS前端的液相洗脫時(shí)間長(zhǎng)，一般會(huì)有十幾分鐘到1個(gè)小時(shí)的持續(xù)分析時(shí)長(zhǎng)，單個(gè)樣本檢測(cè)需要的時(shí)間較長(zhǎng)，這就導(dǎo)致液質(zhì)的檢測(cè)通量低，每日的檢測(cè)樣本量有限。

      北京東西分析儀器公司生產(chǎn)的飛行時(shí)間質(zhì)譜儀為多功能檢測(cè)平臺(tái)，除了從分子水平快速精準(zhǔn)鑒定微生物、核酸基因分型法檢測(cè)致病菌以及檢測(cè)疾病蛋白標(biāo)志物外，此款儀器還可用于檢測(cè)藥物小分子。其實(shí)對(duì)于藥物這種成分相對(duì)簡(jiǎn)單的樣品來(lái)說(shuō)，飛行時(shí)間質(zhì)譜具有獨(dú)特的檢測(cè)技術(shù)優(yōu)勢(shì)：通量高（一次可上樣96個(gè)樣品）、速度快（單個(gè)樣本檢測(cè)僅需10秒左右）、無(wú)需復(fù)雜的樣本前處理。但對(duì)于檢測(cè)小分子（<1000Da）來(lái)說(shuō)，MALDI-TOF存在基質(zhì)峰干擾，小分子質(zhì)量校準(zhǔn)困難等問(wèn)題。東西分析質(zhì)譜應(yīng)用團(tuán)隊(duì)根據(jù)市場(chǎng)的需求，近期開(kāi)發(fā)了基于飛行時(shí)間質(zhì)譜平臺(tái)、專(zhuān)門(mén)用于檢測(cè)藥物小分子成分的方法技術(shù)，不僅解決了基質(zhì)峰干擾和小分子校準(zhǔn)困難的問(wèn)題，而且操作非常簡(jiǎn)單。從樣本前處理到上機(jī)檢測(cè)，到最后出結(jié)果，僅需數(shù)分鐘時(shí)間。

      近日，東西分析運(yùn)用了此技術(shù)對(duì)輝瑞新冠特效藥奈瑪特韋片/利托那韋片（Paxlovid）和印度仿制版藥物-Primovir進(jìn)行了鑒定。

      首先對(duì)兩種藥中是否含有抑制新冠病毒在人體內(nèi)增殖的成分—Nirmatrelvir （奈瑪特韋）進(jìn)行了檢測(cè)。通過(guò)快速、簡(jiǎn)單的樣本前處理， 然后開(kāi)始點(diǎn)靶、干燥和上機(jī)檢測(cè)。我們?cè)谳x瑞新冠特效藥中很快就檢測(cè)到了奈瑪特韋的離子峰（m/z=499.54Da），然而在我們所檢測(cè)的印度仿制藥中卻未檢測(cè)到該質(zhì)量數(shù)的離子峰，這一結(jié)果說(shuō)明此藥盒中的奈瑪特韋片不含Nirmatrelvir這一治療新冠的關(guān)鍵成分。

  

圖3： 飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)Paxlovid和Primovir中成分—奈瑪特韋比對(duì)圖
 

 

      隨后，我們又檢測(cè)了兩種藥中是否含有能夠讓nirmatrelvir在身體里保持更長(zhǎng)時(shí)間活性、更好抗擊病毒的“守護(hù)神”--利托那韋，檢測(cè)結(jié)果顯示兩種藥的利托那韋片中均含有有效成分利托那韋（m/z=720.95Da）。
 

圖4： 飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)Paxlovid和Primovir中成分-利托那韋比對(duì)圖

      此外，在檢測(cè)輝瑞原研藥和印度仿制藥的利托那韋片時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)輝瑞原研藥利托那韋片需要大概50%左右的激光能量才能將其離子化（激光能量為30%時(shí)，依然檢測(cè)不到離子峰，如圖5），而印度仿制藥中的利托那韋，僅需15%的常規(guī)用激光能量就能很好的電離，所用能量?jī)H是輝瑞藥的三分之一。據(jù)此，東西分析建立的飛行時(shí)間質(zhì)譜法可以通過(guò)調(diào)節(jié)激發(fā)藥物電離激光能量的大小，很容易地將同一化合物的不同制劑、即輝瑞原研藥和仿制藥區(qū)分開(kāi)來(lái)。

      這一特點(diǎn)在目前的分析方法中尚未見(jiàn)到報(bào)道。關(guān)于不同制劑對(duì)藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的區(qū)別，以及對(duì)服藥間隔時(shí)間的要求，有待藥理學(xué)家研究。
 

圖5. 不同激光能量激發(fā)下兩種藥中利托那韋對(duì)比圖


Ebio Reader 3700 Plus 飛行時(shí)間質(zhì)譜儀

      Ebio Reader 3700 Plus飛行時(shí)間質(zhì)譜儀基于基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）技術(shù)原理，具有高靈敏度、高精度、檢測(cè)時(shí)間短、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于臨床、疾控、食品安全、農(nóng)業(yè)、工業(yè)、出入境檢疫等領(lǐng)域。
 
      操作簡(jiǎn)單
      無(wú)需復(fù)雜的樣品前處理。
      性能穩(wěn)定
      長(zhǎng)壽命固體激光器；
      飛行管隨環(huán)境溫度、濕度的變化小，保證檢測(cè)的穩(wěn)定 ；
      高效網(wǎng)篩離子源，提高儀器的靈敏度 ；
      PIE高壓脈沖電源控制，實(shí)現(xiàn)離子的延遲推斥，提高整體儀器的分辨能力。 
      軟件智能
      基于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)聚合分類(lèi)法的人工智能軟件；
      擁有強(qiáng)大數(shù)據(jù)庫(kù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)菌種的實(shí)時(shí)鑒定；
      具備聚類(lèi)分析功能，可進(jìn)行T-test等數(shù)據(jù)分析；
      具有自建庫(kù)功能，可根據(jù)用戶(hù)實(shí)際情況建立自有菌種庫(kù) ；
      可根據(jù)用戶(hù)具體需求，進(jìn)行相應(yīng)升級(jí)，用于疾病蛋白標(biāo)志物和核酸基因分型的檢測(cè)。