Protein Maker高通量全自動蛋白純化儀的應用案例
Protein MakerTM高通量全自動蛋白純化儀可以通過平行純化加速您的蛋白功能研究。它具有24個平行純化柱（1-5 ml），并且可以全自動處理96個樣本， Protein MakerTM主要具有的三大操作模式（生產(chǎn)模式、偵測模式、復合模式）以靈活的設計使其可以適用于多個應用場景。接下來，讓我們一起來了解一下吧。
1 生產(chǎn)模式
1.1 抗體生產(chǎn)或篩選——工程抗體的純化
Had是針對病毒抗原靶標的完全人源化抗體，對野生型靶標具有高親和力，而對流行的自然變異株不具有親和力；實驗的目標是提高該抗體對變異株的親和力而不喪失對野生型靶標的親和力。實驗使用1ML的HiTtrap蛋白A柱對24個突變體（在CHO細胞中表達）各純化50 ml。產(chǎn)量為2-10 mg，純化結(jié)果可以為生物物理特性分析（例如SEC/LS、 SDS-PAGE和DSC等分析）以及親和力測定提供足夠的材料。
圖 1 突變體13-24的非還原性和還原性SDS-PAGE結(jié)果
圖 2 突變體1、22和24的SCE液相色譜分析結(jié)果圖
1.2 多個結(jié)構(gòu)的生產(chǎn)和純化
1.2.1 多結(jié)構(gòu)設計和純化
Protein MakerTM高通量全自動蛋白純化儀平行處理可實現(xiàn)多個構(gòu)建體（內(nèi)部缺失突變體）的規(guī)�；兓⑶耀@得具有可以高度結(jié)晶化的結(jié)構(gòu)。實驗利用大腸桿菌優(yōu)化表達基因，表達產(chǎn)量可達到每升細胞培養(yǎng)物表達0.1-15 mg。
圖 3 分別加裂解液和洗脫液的電泳結(jié)果
圖 4 結(jié)晶化電鏡圖
1.2.2 激酶X-17構(gòu)建體的生產(chǎn)
圖 5 平行鎳柱親和純化（4次洗脫）
圖 6 9個結(jié)構(gòu)去除His標簽，并用于晶體篩選
1.3 不同裂解液平行測試
細胞色素P450（CYP51A1）不溶于標準裂解緩沖液，通過改變裂解緩沖液條件使其可溶，Protein MakerTM除了是高通量純化的有效手段，還可以是快速測試多種蛋白質(zhì)靶細胞裂解條件的寶貴工具，實驗測試了12種不同的裂解緩沖液條件，探索細胞色素P450作為靶細胞可溶的特定條件。
表格 1 細胞色素P450的細胞裂解緩沖液測試條件表
圖 7 CYP51A1的12種不同細胞裂解緩沖液條件下的SDS-PAGE分析。紅框帶表示親和層析后兩種產(chǎn)生最佳產(chǎn)率的細胞裂解液條件下的檢測結(jié)果。
1.4 通過并行化實現(xiàn)無風險規(guī)�；�
6×5 ml柱床平行純化，利用Protein MakerTM無需傳統(tǒng)的放大純化步驟，只需四步可以將目標蛋白從20 mg純化到遠大于100 mg，可以通過開發(fā)5×放大方案，重復5-6×初始純化或者平行做各種模式小規(guī)模純化。
圖 8 四步層析結(jié)果圖：①Ni-親和層析；②融合蛋白分離；③2ndNi-親和層析；④大小排除層析
2 偵測模式——不同樹脂平行測試
偵測不同的樹脂（最多24個）以優(yōu)化一種蛋白質(zhì)。
圖 9 利用不同樹脂的層析結(jié)果圖
3 復合模式
3.1 多柱純化
圖 10 自動雙柱純化圖
3.2 兩步純化
利用Ni柱和Protein A柱對Fab進行2步純化。Ni純化的His-tagged Fabs需要額外做純化，尤其是對低產(chǎn)率蛋白，2步純化普遍產(chǎn)率較高，Ni純化后需要利用緩沖液進行交換，而Protein A被串聯(lián)添加后可以提高純度并且不需要再進行緩沖液的交換。
圖 11 不同條件下電泳結(jié)果圖：①通道表示無細胞提取物；②通道表示Ni純化；③通道表示Ni和Protein A純化
Protein MakerTM除了具有以上這些場景的應用優(yōu)勢外，配置的軟件系統(tǒng)也非常方便快捷，可定制化純化方案，并且提供實時的純化狀態(tài)信息，您可以通過軟件隨時暫停任何過程，純化結(jié)束，軟件還可以幫助分析和共享結(jié)果。結(jié)合以上優(yōu)點，相信，Protein MakerTM一定可以助力您的蛋白純化相關(guān)研究。
