蛋白質(zhì)定量是許多蛋白質(zhì)生物學(xué)工作流程的重要組成部分,是蛋白質(zhì)電泳、蛋白質(zhì)印跡、質(zhì)譜和免疫分析等常用技術(shù)之前的必要步驟。與傳統(tǒng)的BCA、Bradford等比色法測蛋白的方式相比,熒光法測蛋白動態(tài)范圍更寬、準(zhǔn)確性更高。
蛋白質(zhì)定量是許多蛋白質(zhì)生物學(xué)工作流程的重要組成部分,是蛋白質(zhì)電泳、蛋白質(zhì)印跡、質(zhì)譜和免疫分析等常用技術(shù)之前的必要步驟。與傳統(tǒng)的BCA、Bradford等比色法測蛋白的方式相比,熒光法測蛋白動態(tài)范圍更寬、準(zhǔn)確性更高。
試劑及儀器
• Qubit™ Protein Assay Kits(Thermo:Q33212)
• Qubit 4熒光計(Thermo)
• Fluo-200熒光計(奧盛)
• Feyond-A300多功能酶標(biāo)儀(奧盛)
方法
• 標(biāo)品配置
加樣體積 | 10μL |
標(biāo)品配制 | 將試劑盒中最高濃度的400ng/uL蛋白標(biāo)品稀釋配制成300、200、100、50、25、12.5ng/uL共6個濃度,試劑盒濃度范圍在12.5 µg/mL 到 5 mg/mL。 |
• 操作步驟
1.根據(jù)試劑說明書,制備染料Mix工作液及0、200及400ng/uL校準(zhǔn)點試劑,校準(zhǔn)曲線完成后,分別在Qubit4與Fluo-200上進(jìn)行檢測;
試劑波長 | EX/EM:470/525 |
PMT增益 | 中低 |
穩(wěn)定時間 | 150ms |
積分時間 | 40μs |
理論濃度 | Qubit4 | Fluo-200 | Feyond-A300 |
12.5 | 20 | 19.11 | 8.023 |
25 | 33.2 | 30.59 | 29.319 |
50 | 50.6 | 46.16 | 50.626 |
100 | 95.2 | 92.94 | 101.835 |
200 | 184 | 192.39 | 197.206 |
300 | 286 | 299.71 | 302.978 |
400 | 400 | 401.22 | 398.596 |