腸菌-腦軸-免疫：腸道菌群調(diào)控阿爾茨海默病的新機(jī)制
美國(guó)埃默里大學(xué)葉克強(qiáng)教授等人于2022年1月在Gut（IF 23.059）期刊發(fā)表題為“Gut microbiota regulate Alzheimer’s disease pathologies and cognitive disorders via PUFA associated neuroinflammation”的文章，該研究通過(guò)阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）小鼠模型和人源化糞菌移植（FMT）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AD相關(guān)腸道菌群（以擬桿菌屬富集為特征）可通過(guò)激活C/EBPβ/AEP通路，并上調(diào)促炎癥性的多不飽和脂肪酸（Poly-unsaturated fatty acid，PUFA）代謝，以增強(qiáng)小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化及神經(jīng)炎癥，從而促進(jìn)AD病理及認(rèn)知障礙。這些發(fā)現(xiàn)支持行為缺陷、小膠質(zhì)細(xì)胞激活和AD病理需要復(fù)雜的腸道微生物組，腸道微生物組有助于AD小鼠模型的病理，并且人類微生物組的失調(diào)可能是AD的危險(xiǎn)因素。
研究材料
SPF 3×Tg AD小鼠、無(wú)菌小鼠（GF，3×Tg品系）、AD患者糞菌、3株擬桿菌屬菌株
技術(shù)路線
· 步驟1：腸道菌群可促進(jìn)AD小鼠的AD病理、認(rèn)知障礙及小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化，激活C/EBPβ/AEP通路，上調(diào)PUFA代謝相關(guān)促炎癥酶表達(dá)；
· 步驟2：腸道菌群增加小鼠大腦中的炎癥性代謝產(chǎn)物水平，調(diào)節(jié)炎癥性通路及胰島素/IGF-1通路，短鏈脂肪酸（SCFAs）驅(qū)動(dòng)C/EBPβ/AEP通路活化、AD小鼠的認(rèn)知障礙及炎癥；
· 步驟3：PUFA代謝相關(guān)擬桿菌屬菌株在移植了AD患者菌群的無(wú)菌小鼠中增加，增強(qiáng)小鼠的AD病理及認(rèn)知障礙，促進(jìn)C/EBPβ/AEP通路活化，并上調(diào)炎癥。
研究結(jié)果
1. 腸道菌群刺激3×Tg小鼠AD病理、認(rèn)知缺陷和小膠質(zhì)細(xì)胞激活
與SPF 3×Tg AD小鼠相比，3×Tg衍生GF小鼠海馬和纖維狀蛋白包涵體中的AT8、Aβ42減少，表明當(dāng)腸道菌群耗盡時(shí)，AD病理得到緩解（圖1 A-C）。同時(shí)，Y迷宮中的行為表明，GF小鼠與SPF小鼠相比，空間記憶功能顯著改善（圖1 D、E）。半自動(dòng)定量形態(tài)三維測(cè)量顯示，與SPF小鼠相比，GF小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了顯著改變（圖1 F-I）。
圖1 與SPF小鼠相比，無(wú)菌小鼠顯示出AD病理減少和認(rèn)知功能改善
2. 腸道菌群激活C/EBPβ/AEP通路，提高PUFA代謝相關(guān)促炎酶表達(dá)水平
最近的研究表明C/EBPβ/AEP信號(hào)通路在時(shí)間和空間上調(diào)控AD病理，為了評(píng)估是否需要完整的腸道微生物組來(lái)刺激這一通路，從而導(dǎo)致AD發(fā)病機(jī)制，作者通過(guò)免疫印跡分析，發(fā)現(xiàn)與SFP小鼠相比，GF小鼠大腦中的C/EBPβ/AEP信號(hào)傳導(dǎo)減弱，作為記憶障礙導(dǎo)致AD發(fā)病和炎癥核心網(wǎng)絡(luò)的花生四烯酸（AA）代謝途徑相關(guān)的Lox5、Cox1和Cox2水平明顯降低（圖2 A、B）。蛋白酶測(cè)定顯示GF小鼠的AEP酶活性低于SPF小鼠，這與活性AEP水平降低保持一致（圖2 C）。GF小鼠中IL-6濃度（C/EBPβ是其主要轉(zhuǎn)錄因子）顯著降低（圖2 D）。qPCR結(jié)果顯示，GF小鼠的CEBPβ靶點(diǎn)/AA通路基因表達(dá)下降（圖2 E），與RNAseq數(shù)據(jù)趨勢(shì)一致。上述結(jié)果表明，復(fù)雜的腸道菌群促進(jìn)AD小鼠模型的病理過(guò)程。
最近的研究表明C/EBPβ/AEP信號(hào)通路在時(shí)間和空間上調(diào)控AD病理，為了評(píng)估是否需要完整的腸道微生物組來(lái)刺激這一通路，從而導(dǎo)致AD發(fā)病機(jī)制，作者通過(guò)免疫印跡分析，發(fā)現(xiàn)與SFP小鼠相比，GF小鼠大腦中的C/EBPβ/AEP信號(hào)傳導(dǎo)減弱，作為記憶障礙導(dǎo)致AD發(fā)病和炎癥核心網(wǎng)絡(luò)的花生四烯酸（AA）代謝途徑相關(guān)的Lox5、Cox1和Cox2水平明顯降低（圖2 A、B）。蛋白酶測(cè)定顯示GF小鼠的AEP酶活性低于SPF小鼠，這與活性AEP水平降低保持一致（圖2 C）。GF小鼠中IL-6濃度（C/EBPβ是其主要轉(zhuǎn)錄因子）顯著降低（圖2 D）。qPCR結(jié)果顯示，GF小鼠的CEBPβ靶點(diǎn)/AA通路基因表達(dá)下降（圖2 E），與RNAseq數(shù)據(jù)趨勢(shì)一致。上述結(jié)果表明，復(fù)雜的腸道菌群促進(jìn)AD小鼠模型的病理過(guò)程。
圖2 無(wú)菌小鼠表現(xiàn)出減弱的C/EBPβ/AEP通路和AA相關(guān)炎癥
3. 腸道菌群提高炎癥代謝物水平，并改變大腦中的炎癥和胰島素/IGF-1途徑
為了評(píng)估腸道微生物組對(duì)AD相關(guān)轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的整體影響，作者對(duì)GF和SPF小鼠海馬樣本轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，結(jié)果顯示兩者整體基因表達(dá)模式存在顯著差異，與GF小鼠相比，參與AA代謝途徑的基因在SPF小鼠中差異表達(dá)（上調(diào)：Hpgd、Ptges3和Cyp1b1；下調(diào)：Ptges2），這與上述的觀測(cè)結(jié)果相符（圖3 A-D）。此外，SPF小鼠的胰島素信號(hào)傳導(dǎo)及其相關(guān)的下游途徑發(fā)生了異常改變，免疫印跡實(shí)驗(yàn)也證明了這一結(jié)果（圖3 E、F）。這些結(jié)果表明，腸道菌群影響AD小鼠海馬區(qū)基因的表達(dá)。
圖3 腸道菌群影響AD小鼠模型海馬區(qū)mRNA表達(dá)的轉(zhuǎn)錄組圖譜
4. SCFAs可引起GF小鼠C/EBPβ/AEP激活、認(rèn)知障礙和炎癥反應(yīng)，并被PGE2-G促進(jìn)
前期研究表明SCFAs與AD相關(guān)，GF小鼠糞便和血清中SCFAs水平降低。為了研究SCFAs是否會(huì)部分模擬定殖SPF小鼠的腸道菌群觸發(fā)C/EBPβ/AEP通路激活，作者設(shè)置了GF小鼠SCFAs補(bǔ)充飼喂實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，相比對(duì)照GF小鼠，補(bǔ)充SCFAs小鼠中C/EBPβ下游靶標(biāo)、AEP蛋白酶活性、IL-6和Aβ42水平顯著增加，認(rèn)知緩解水平降低（圖4 A-H）。代謝組分析結(jié)果顯示，與SPF相比，GF小鼠糞便中的PUFA代謝物顯著減少，同時(shí)補(bǔ)充SCFAs和PGE2-G（代謝組分析鑒定出的標(biāo)志物）刺激小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的成熟和活化（圖4 J-L）。這些結(jié)果表明SCFAs可引起GF小鼠C/EBPβ/AEP激活、認(rèn)知障礙和炎癥反應(yīng)，并被PGE2-G促進(jìn)。
圖4 SCFAs引發(fā)無(wú)菌小鼠炎癥反應(yīng)中C/EBPβ/AEP的激活和認(rèn)知缺陷，PGE2-G能加劇這些反應(yīng)
5. FMT后受體小鼠腸道特定菌群增加，增強(qiáng)AD病理，促進(jìn)認(rèn)知障礙
為了確定人源性腸道菌群在轉(zhuǎn)移到GF小鼠時(shí)是否會(huì)影響疾病結(jié)果，作者分別將AD患者和健康人（HC）糞便移植給GF小鼠。結(jié)果顯示受體小鼠腸道菌群和供體相似，AD受體小鼠中擬桿菌屬的3個(gè)種相對(duì)豐度顯著增加（圖5 A-E），體外定量實(shí)驗(yàn)表明，這3種微生物參與AA代謝，并產(chǎn)生AA衍生物（圖5 I）。免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，受體小鼠ThS陽(yáng)性Aβ聚集體、AT8/T22和Aβ42增加（圖6 A-C）。與HC小鼠相比，AD受體小鼠在Y迷宮中表現(xiàn)出認(rèn)知缺陷，小膠質(zhì)細(xì)胞高度活化且形態(tài)成熟（圖6 D-K）。這些結(jié)果表明AD患者腸道菌群會(huì)促進(jìn)GF受體小鼠AD進(jìn)程。
圖5 移植AD患者糞菌后的無(wú)菌小鼠腸道擬桿菌屬相對(duì)豐度升高
圖6 移植AD患者糞菌后的無(wú)菌小鼠表現(xiàn)出增強(qiáng)的AD病理和認(rèn)知缺陷
6. FMT后受體小鼠C/EBPβ/AEP通路激活且與炎癥水平升高相關(guān)
免疫印跡結(jié)果顯示p-C/EBPβ及其總蛋白、AEP及其上游轉(zhuǎn)錄因子、C/EBPβ及其下游響應(yīng)基因水平均顯著增加（圖7 A-C）。炎性細(xì)胞因子定量和qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AD受體小鼠中IL-6和IL-1β、ALOX-5相關(guān)基因表達(dá)水平顯著增加（圖7 D、E）。
免疫印跡結(jié)果顯示p-C/EBPβ及其總蛋白、AEP及其上游轉(zhuǎn)錄因子、C/EBPβ及其下游響應(yīng)基因水平均顯著增加（圖7 A-C）。炎性細(xì)胞因子定量和qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AD受體小鼠中IL-6和IL-1β、ALOX-5相關(guān)基因表達(dá)水平顯著增加（圖7 D、E）。
圖7 移植AD患者糞菌后的無(wú)菌小鼠小鼠表現(xiàn)出C/EBPβ/AEP通路激活且與炎癥水平升高相關(guān)
小編小結(jié)
本文的研究結(jié)果表明，人類微生物組可能是阿爾茨海默病的危險(xiǎn)因素。通過(guò)個(gè)性化飲食、有益微生物群干預(yù)以及糞菌移植來(lái)調(diào)節(jié)腸道微生物群或可有助于減少炎癥和治療包括AD在內(nèi)的腦部疾病。
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· 轉(zhuǎn)錄/蛋白質(zhì)組----對(duì)終端靶器官應(yīng)對(duì)炎癥響應(yīng)機(jī)制的系統(tǒng)描述
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