光學(xué)成像技術(shù)的最新進(jìn)展有助于在種子質(zhì)量方面進(jìn)行快速、準(zhǔn)確和無損的分析。這項(xiàng)工作旨在驗(yàn)證葉綠素?zé)晒鈭D像作為分析花生種子生理潛力的新標(biāo)記的潛力。使用人工老化0、16、24和48 h的種子,分別在630/700 nm和405/600 nm的激發(fā)/發(fā)射組合中檢測到葉綠素a和b的熒光信號(hào)。使用 VideometerLab4 設(shè)備(Videometer A/S,Herlev,丹麥)及其軟件版本 5.4.6 捕獲圖像。將數(shù)據(jù)與用于評(píng)價(jià)花生種子生理性能的傳統(tǒng)試驗(yàn)如發(fā)芽試驗(yàn)、電導(dǎo)率、出苗和出苗速度指數(shù)等進(jìn)行比較。結(jié)果表明,活力較低的種子中葉綠素a和b的熒光強(qiáng)度較低。因此,花生種子的變質(zhì)過程伴隨著葉綠素分子的分解,從而導(dǎo)致種子熒光特性的變化。從實(shí)用的角度來看,葉綠素?zé)晒鈭D像可以成功地用于快速、準(zhǔn)確和無損地區(qū)分高活力和低活力種子批次。
關(guān)鍵詞:種子活力;圖像分析; 非破壞性方法
使用Videometerlab4設(shè)備(Videometer A/S,Herlev,丹麥)(圖 1)及其軟件版本 5.4.6 捕獲和分析葉綠素a和b熒光圖像。葉綠素a和b分別在630/700nm和405/600 nm 的激發(fā)/發(fā)射組合中檢測到熒光。隨后,使用歸一化典型判別分析 (nCDA) 算法對(duì)圖像進(jìn)行轉(zhuǎn)換。
圖1.VideometerLab4設(shè)備用于分析不同活力水平花生種子中葉綠素a和b的熒光圖像
7天和14天的標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)沒有表明種子類別之間的統(tǒng)計(jì)差異(圖 2A)。然而,電導(dǎo)率測試表明,陳化24和48小時(shí)的種子類別的值高于陳化0和16小時(shí)的種子(圖2B)。較高的電導(dǎo)率與細(xì)胞膜的退化反應(yīng)有關(guān),因此會(huì)降低種子活力(BARBOZA DA SILVA 等人,2013 年)。此外,對(duì)膜造成的損害導(dǎo)致從老化48小時(shí)的種子生長的幼苗出苗率較低(圖 2C),盡管處理之間的出苗速度指數(shù)相似(圖2D)。盡管標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)的靈敏度不足以檢測類別之間的差異(圖2A),但葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)可以區(qū)分不同活力水平的種子,其中活力較高的種子(0小時(shí))顯示出較高的葉綠素?zé)晒庵礱和b(圖3A、B)。
圖2.人工陳化0、16、4、48 h花生種子發(fā)芽活力試驗(yàn)
圖3.(A)葉綠素a激發(fā)/發(fā)射組合630/700nm 的熒光;(B)葉綠素b熒光在405/600 nm的激發(fā)/發(fā)射組合下
此外,還檢測到葉綠素a和b的熒光差異,以評(píng)估種子的圖像模式(圖4),其中老化種子類別的像素顯示出低于未老化種子的值(即,較低的葉綠素?zé)晒鈴?qiáng)度)種子。
圖4.人工老化0、16、24和48小時(shí)的花生種子的 RGB(紅-綠-藍(lán))圖像和在630/700nm激發(fā)/發(fā)射組合下捕獲的葉綠素a熒光圖像
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