引言:分枝桿菌屬( Mycobacterium)是一類細(xì)長(zhǎng)略彎曲的桿菌,因有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)而得名。細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì),主要是分枝菌酸,一般不易著色,若經(jīng)加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間而著色后能抵抗強(qiáng)脫色劑鹽酸乙醇的脫色,故又稱抗酸桿菌,且不易破壁。本次實(shí)驗(yàn)ATS破壁機(jī)將樣品做兩部分處理,對(duì)比破壁結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)對(duì)象
胞內(nèi)分枝桿菌
實(shí)驗(yàn)儀器
高速離心機(jī)
ATS破壁機(jī)
顯微鏡
實(shí)驗(yàn)背景
分枝桿菌屬( Mycobacterium)是一類細(xì)長(zhǎng)略彎曲的桿菌,因有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)而得名。本菌屬的顯著特性為:①細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì);②無鞭毛、無芽胞,也不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素;③對(duì)人致病的主要有結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌;④所致感染多為慢性過程,長(zhǎng)期遷延并有破壞性的組織病變。
實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)
細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì),主要是分枝菌酸,一般不易著色,若經(jīng)加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間而著色后能抵抗強(qiáng)脫色劑鹽酸乙醇的脫色,故又稱抗酸桿菌,且不易破壁。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
將胞內(nèi)分枝桿菌進(jìn)行破壁,后續(xù)提取蛋白。
實(shí)驗(yàn)工藝
1.預(yù)處理:將滅活后的胞內(nèi)分枝桿菌液體(非結(jié)核)分為兩部分,一部分不作處理;一部分做堿處理,離心后去上清加水再重懸。
2.實(shí)驗(yàn)工藝:ATS破壁機(jī)搭配一級(jí)模塊后,控低溫處理。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
A.未處理的菌液破壁結(jié)果
通過對(duì)菌液進(jìn)行抗酸染色后觀察,破壁前菌液呈紫色,在破壁次數(shù)相同的條件下,隨著壓力的增高,胞內(nèi)分枝桿菌顏色偏向藍(lán)色。
100倍油鏡顯示,壓力越高,破壁效果越好。(壓力排序:A<B<C<D)
破壁前
破壁后
B.堿處理菌液破壁結(jié)果
同壓力同次數(shù)下,堿處理后的菌液破壁效果明顯提高。
(堿處理) (未處理)