抗體是生命科學(xué)研究、診斷和測(cè)試中常用的試劑之一。盡管它們被廣泛使用但目前還沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)指南來(lái)定義它們?cè)谑褂们皯?yīng)如何進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果是許多商業(yè)抗體沒(méi)有得到充分驗(yàn)證和/或無(wú)法獲得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 未驗(yàn)證的抗體驗(yàn)證導(dǎo)致了不可重復(fù)的結(jié)果，甚至項(xiàng)目被放棄，造成時(shí)間、金錢和樣品的巨大損失 。因此，迫切需要驗(yàn)證抗體并為其創(chuàng)建通用標(biāo)準(zhǔn)。

什么是抗體驗(yàn)證？

抗體驗(yàn)證定義為以下幾點(diǎn)：證明特異性（抗體區(qū)分不同抗原的能力），證明在將要使用的應(yīng)用中的特異性，證明親和力（抗體與表位結(jié)合的強(qiáng)度） ) 并最終證明可重復(fù)性。然而，雖然抗體驗(yàn)證的這種定義是實(shí)用的，但其廣泛應(yīng)用或標(biāo)準(zhǔn)化過(guò)程的實(shí)施仍然是一個(gè)重要的關(guān)注領(lǐng)域。

一些抗體銷售公司驗(yàn)證了他們的產(chǎn)品，而其他公司根本不驗(yàn)證它們。之所以出現(xiàn)這些差異，是因?yàn)榕c藥物不同，沒(méi)有機(jī)構(gòu)管理可以出售的物品。但隨著市場(chǎng)的快速增長(zhǎng)，質(zhì)量聲譽(yù)正在成為一些供應(yīng)商商業(yè)計(jì)劃的一部分，抗體驗(yàn)證現(xiàn)在被視為一種競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。

驗(yàn)證抗體的責(zé)任在于供應(yīng)商本身，無(wú)論他們是制造該抗體還是簡(jiǎn)單地分銷它。但是，雖然供應(yīng)商對(duì)其銷售的試劑質(zhì)量負(fù)責(zé)，但抗體性能可能會(huì)因超出其驗(yàn)證工作范圍的原因而有所不同 。例如，抗體在運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生變化，或者雖然驗(yàn)證可以在具有適當(dāng)控制的生物相關(guān)系統(tǒng)中完成，但最終用戶很可能會(huì)在他們自己的系統(tǒng)中使用它。因此，最終用戶也有責(zé)任驗(yàn)證他們的抗體。不同的制造商已經(jīng)提出了驗(yàn)證過(guò)程。

通過(guò)采取幾個(gè)小步驟，研究人員可以在運(yùn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)降低風(fēng)險(xiǎn)，而無(wú)需對(duì)他們獲得的抗體進(jìn)行批判性思考。
 
抗體的驗(yàn)證工作流程

抗體的驗(yàn)證工作流程如下：

1.識(shí)別針對(duì)感興趣蛋白質(zhì)的所有商業(yè)抗體；
2.使用 PaxDB 來(lái)識(shí)別以相對(duì)高水平表達(dá)感興趣蛋白質(zhì)的細(xì)胞系并且很容易被 CRISPR/Cas9 修改；
3.生成 KO 細(xì)胞系并通過(guò)定量免疫印跡篩選抗體；
4.使用步驟 3 中確定的特異性抗體來(lái)篩選細(xì)胞系面板；
5.根據(jù)步驟 4 中的信息選擇目標(biāo)蛋白高表達(dá)的細(xì)胞系，可通過(guò) CRISPR/Cas9 進(jìn)行編輯，并具有目標(biāo)目標(biāo)的適當(dāng)特征；
6. 使用選定的編輯線通過(guò)免疫沉淀和免疫熒光篩選特異性抗體；