《小鼠鏟屎官養(yǎng)成記》，每周為大家介紹一個小鼠繁育與健康的知識點，帶大家成為一個合格的小鼠鏟屎官。在進行實驗研究的時候，小鼠的健康可能會影響到實驗研究結(jié)果的準確性與可重復性！前幾期我們給大家介紹了小鼠健康監(jiān)測方式以及常見的健康檢測方法，那么檢測結(jié)果出現(xiàn)陽性該怎么處理呢？

對陽性結(jié)果進行確認和分析
1.為什么要驗證陽性結(jié)果
☑ 即使最好的檢測方法，也有可能出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，這是方法本身或人員操作的問題。例如ELISA法就比較容易出現(xiàn)假陽性；

☑ 之前的文章有提到，不同檢測機構(gòu)的檢測結(jié)果可能是不一樣的；

☑ 所以一定要驗證陽性結(jié)果。

2.如何驗證陽性結(jié)果
☑ 直接溝通：如果可以的話，一定要和檢測人員對陽性結(jié)果進行討論。如果是國內(nèi)的檢測機構(gòu)，可以直接溝通。國外機構(gòu)需要發(fā)郵件，而且有時差，溝通會比較耗時；

☑ 對方的驗證方法：很多檢測機構(gòu)，在告訴你陽性結(jié)果的時候，其實已經(jīng)驗證過了。所以你要跟對方確認，是用什么方法，怎么去驗證的；

☑ 最好使用另一種方法驗證：比如ELISA檢測陽性，然后使用IFA法對同一樣本進行驗證。只有兩種檢測方法驗證的檢測結(jié)果是一致，檢測結(jié)果的可信度才會高一些。如果對方是用同一種方法，操作了兩次，你一定是要打問號的；

☑ 推薦送不同的檢測機構(gòu)去驗證：這也是之前提到的，你要熟悉你的友軍。

確認感染范圍
經(jīng)過確認真的感染了病原體之后，我們要理性地接受事實并進行分析。

1.首先要分析病原體的傳播途徑
【養(yǎng)兵千日】
☑ 平時就要把相關(guān)病原體的所有的資料都收集到一起。這個需要平時有意識地搜集資料并進行整理，一定避免臨時抱佛腳；

☑ 在資料整理時，要有意識的排序。權(quán)威的、經(jīng)典的資料排在前面，并一定要注明資料來源；

☑ 如果是英文資料，最好要整理成中英文對照，中文方便自己和他人理解，英文方便確認翻譯的準確性。

【用兵冷靜】
☑ 把手頭所有的資料都看一遍；

☑ 先看權(quán)威性高且比較新的資料，再看比較舊的資料；

☑ 要并梳理出所有可能的漏洞，都重新推敲一遍。

【窮盡所有可能性】
☑ 有些病原體通過糞口途徑傳播，有些通過人員操作不嚴格傳播，有些通過氣溶膠傳播，有些通過污染環(huán)境而傳播，還有一些病原體是混合傳播的；

☑ 所以，在分析的時候，要列出所有可能性，然后逐一排查。

2.根據(jù)傳播途徑，
推測病原體在設施內(nèi)的傳播范圍
【推測，然后去驗證】
☑ 傳染性非常強的病原體，例如小鼠諾如病毒、小鼠肝炎病毒、體外寄生蟲等。需要考慮整個設施感染的風險；

☑ 某些傳染性比較差的病原體，比如說螺旋桿菌，在管理嚴格的設施，可能只局限于某個籠架的幾個鼠籠；

☑ 在推測出病原體的傳播范圍之后，要對不同的區(qū)域，設計不同的采樣比例去采樣送檢。因為推測畢竟只是推測，需要去驗證。

【結(jié)果，再評估】
☑ 通過檢測結(jié)果，再次評估病原體在設施內(nèi)的感染范圍。我們只有在拿到檢測結(jié)果之后，才能確認感染范圍，一定要用數(shù)據(jù)說話；

☑ 然后把設施分為三個區(qū)域：
低風險區(qū)——目前沒有檢測到陽性，需要持續(xù)關(guān)注的；
中風險區(qū)——目前沒有檢測到陽性，但是有感染的風險，需要加強檢測，持續(xù)關(guān)注；
高風險區(qū)——已經(jīng)檢測到陽性，需要進一步評估處理方案的。
可以參考新冠病毒的低風險區(qū)、中風險區(qū)、高風險區(qū)。

查找感染來源
1.梳理所有環(huán)節(jié)
有時很難，但是一定要盡力去思考去分析，對所有的環(huán)節(jié)進行梳理。可以采用思維導圖輔助梳理。

2.分析陽性樣本
我們還要對所有的陽性樣本進行分析，分析這些陽性樣本之間有沒有規(guī)律，這些陽性樣本是在一個飼養(yǎng)室，同一個操作人員，同一個籠架，還是說壓根沒有任何關(guān)系，完全隨機的。這種陽性樣本之間的關(guān)系，對分析樣本的感染來源也是非常關(guān)鍵的。

3.查從內(nèi)到外
從動物的來源、接觸的物料、物品進入方式、人員操作、消毒效果等等都要逐一排查。在這些關(guān)鍵因素都排查過之后，如果還沒有找到原因，你可以擴大排查范圍，可以去查倉庫、供應商、檢測機構(gòu)等等。所有你能想到的因素都要去查，直到找到感染來源。

4.示例
舉個例子，幾年前，賽業(yè)的動物樣本，送國外機構(gòu)進行COA檢測，PCR方法檢測到了乙型溶血鏈球菌。后來我們追查，這個菌來源于飼料中的魚粉。因為是輻照飼料，而且飼料無菌檢測是陰性的，所以這個菌是飼料中的死菌殘留，會隨著糞便排出體外，對動物沒有影響。這就提醒我們，當檢測到陽性結(jié)果的時候，不一定是動物本身的問題。

對陽性病原體不同的策略
根據(jù)病原體對設施、對動物、對實驗的影響，制定處理方案，沒有統(tǒng)一的標準。

1.無需清除
你知道這個病原體的存在，經(jīng)過評估對動物的影響有限，沒有必要清除或者清除的代價太大，可以放棄。例如之前推文提到的奇異變形桿菌。

2.test and cull
進行大規(guī)模的篩查，然后剔除檢測到的所有陽性動物。這點需要對這個病原體有自檢能力。否則送外部檢測，這個檢測費用是非常昂貴的。還要求有能力將病原體控制在一定范圍之內(nèi)，否則人員操作如果不規(guī)范，以人員為媒介傳播病原體，分分鐘讓你的心血付諸東流。

3.逐步淘汰，重新建群
經(jīng)過評估，病原體對種群影響有限，對動物使用的影響有限，考慮到種種原因，可以不立即淘汰種群。然后制定淘汰計劃，逐步淘汰就行。

4.緊急淘汰，控制感染，重新建群
經(jīng)過評估，病原體對種群影響很大，傳染性很強，或者對設施內(nèi)的其他動物種群有影響，那我們就需要考慮立即淘汰，重新建群。例如小鼠肝炎病毒對于生產(chǎn)設施，就必須盡快淘汰，重新建群。

清除病原體的方式
1.IVF凈化
即胚胎移植，是目前最可靠的凈化方式。理論上有個別病原體不能通過IVF凈化的方式清除。例如：淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒，POLY（多瘤病毒）和腎細小病毒（MKPV）。但是前兩種病毒出現(xiàn)的比例極低，腎細小病毒是新發(fā)現(xiàn)的，目前國內(nèi)機構(gòu)關(guān)注的比較少。可以考慮使用臟墊料哨兵鼠方法進行監(jiān)測。

2.剖宮產(chǎn)凈化
是一種比較經(jīng)典的凈化方式。有資料表明能夠有效的清除小鼠細小病毒、幽門螺桿菌和MNV。但是它的可靠性比起IVF的要稍微差一點。所以為了保證凈化效果，可以考慮兩輪剖宮產(chǎn)凈化。

3.交叉哺乳
也稱為代乳。有資料表明代乳能有效清除多種常見的小鼠病原體，包括MPV、MHV、MNV和幽門螺桿菌。與剖腹產(chǎn)相比，它的優(yōu)勢在于成本更低，而且不需要對有價值的母鼠實施安樂死。

4.test and cull
有資料表明，這種方式能夠有效清除幽門螺桿菌、細小病毒、MHV、MNV和小鼠輪狀病毒。但這種方式對檢測能力、設施管理能力、人員操作要求比較高。

5.藥物治療
藥物治療效果不可靠，而且只適用于個別的病原體，有資料提到IVC飼養(yǎng)的撓蟲和螨蟲的治療�？梢钥紤]用于特別珍貴的稀有品系，不適合用于治療大規(guī)模種群動物。

6.burn-out
如果一個種群發(fā)現(xiàn)了病毒感染，在停止繁育和新引進動物的基礎(chǔ)上，讓該病毒在現(xiàn)有免疫健全動物中充分傳播、感染所有動物并通過動物的免疫系統(tǒng)清除病毒，使病毒在現(xiàn)有動物群體中“燃盡“（Burn out），這一過程約需要15周。歷史上曾成功過，但目前不建議使用。因為這種成功，在我們現(xiàn)在這種設施以及現(xiàn)在飼養(yǎng)的動物種群中，已經(jīng)很難復制了。