螺旋平板法
螺旋平板法(Spiral plate method)是一種新式微生物快速定量方法,由J.E. Gilchrist、C.B. Donnelly等人最先于1973年提出,主要用于菌落總數(shù)測定。
螺旋接種菌落計數(shù)是依據(jù)阿基米德螺旋原理,使樣品以對數(shù)規(guī)律螺旋線形式接種在平板上。
樣品接種后,菌落即分布在螺旋軌跡上,隨半徑的增加分布得越來越稀。
采用特殊的計數(shù)柵格,自平板外周向中央對平皿上的菌落進行計數(shù),即可得到樣品中微生物的數(shù)量。
實驗步驟
取制備好的適宜稀釋度的樣品稀釋液;
選擇模式進行接種;
將平板按標準方法中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度進行培養(yǎng);
計數(shù)每個平板菌落數(shù),并記錄下來。
螺旋平板法使我們能在培養(yǎng)皿表面接種呈對數(shù)遞減的曲線。體積是被校準過的,培養(yǎng)皿上每個點的容量都是可知的。計數(shù)培養(yǎng)皿指定區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù),除以該區(qū)域的接種體積,以此可計算出細菌濃度。
經(jīng)過多年的應(yīng)用,螺旋平板法已被國外微生物學(xué)界普遍認可,被列為美國分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC)的官方方法,也被美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)和國際標準化組織(ISO)列為檢測致病菌的標準方法。
我國也在《GB 4789.28-2013食品微生物學(xué)檢驗—培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》和《SN/T 2098-2008食品和化妝品中的菌落計數(shù)檢測方法—螺旋平板法》中對螺旋平板法的實驗要求和具體步驟都作了明確規(guī)定。
為什么選擇螺旋平板法?
◆ 無需梯度稀釋和逐個接種平板,在一塊平板上即可產(chǎn)生最大1000倍的濃度梯度
◆ 簡化實驗步驟,節(jié)省操作時間
◆ 節(jié)省大量實驗材料,節(jié)約費用
◆ 樣品接種量精確,提高微生物定量實驗的準確度
◆ 不會在平板邊緣長菌,更易計數(shù)
微生物學(xué)研究結(jié)果的可重復(fù)性很大程度上依賴于優(yōu)良的樣品制備。螺旋平板法作為一種新式微生物快速定量方法可降低試驗成本、提高實驗效率,優(yōu)勢突出,應(yīng)用前景廣闊。
杭州大微研發(fā)的DW-L2000型全自動微生物平皿螺旋接種儀依據(jù)阿基米德螺旋,以遞減比率自動接種樣本,可實現(xiàn)標準化大量單顆菌落,方便后續(xù)菌落計數(shù)、菌落分析純化等實驗需求,廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、藥學(xué)實驗室等任何微生物實驗室。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
√ 接種模式:整合市面所有的接種模式,如指數(shù)模式、對數(shù)模式、比例模式、微分模式等等,每種模式均以加樣半徑為橫坐標、加樣體積為縱坐標,以阿基米德螺旋線為路徑進行接種。
√ 無菌保證:專利設(shè)計的一次性微量加樣頭能做到真正無菌取樣。無需清潔消毒,杜絕消毒劑殘留帶來的任何可能的假陰性結(jié)果。
√ 適用性強:特殊設(shè)計的加樣頭緩沖結(jié)構(gòu),培養(yǎng)基厚度適用范圍大,對培養(yǎng)基表面平整度無要求。
√ 用途多樣:可在單一平皿中產(chǎn)生1000-10000倍(采用150mm平皿)的濃度梯度,免除連續(xù)稀釋和大量接種過程。除細菌計數(shù)外,該儀器也可用于抗菌敏感性測試(AST)和AEMS實驗。使用線性模式可改善AMES實驗誘變濃度閾值的檢測。