抗體作為基礎(chǔ)科學(xué)研究和臨床試驗(yàn)常用的工具之一，主要通過(guò)抗原-抗體的反應(yīng)揭示蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)中的變化。

盡管它們被廣泛的使用，但是沒(méi)有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以確保商業(yè)抗體特異性和質(zhì)量上的一致性。這使得科學(xué)界一直存在“重現(xiàn)危機(jī)”，浪費(fèi)了科學(xué)家們大量的時(shí)間和金錢(qián)，妨礙生命科學(xué)研究的快速發(fā)展。因此，對(duì)抗體進(jìn)行敏感性和特異性測(cè)試，確保質(zhì)量和可重復(fù)性至關(guān)重要。

眾所周知，基因敲除（Knock Out,KO）作為最被大家認(rèn)可、最被信任的一種抗體特異性驗(yàn)證方法，是一項(xiàng)非常穩(wěn)健的技術(shù)，可在不表達(dá)目的蛋白的 KO 細(xì)胞系或組織中通過(guò)檢測(cè)目的抗體來(lái)確證其特異性。

為了確定華安抗體產(chǎn)品的功能性、特異性、敏感性，我們對(duì)不同的產(chǎn)品是采用不同的驗(yàn)證策略來(lái)確保我們抗體產(chǎn)品在科研工作中的真實(shí)有效。為了確保大家可以擁有高度特異性的抗體，我們通過(guò) CRISPR-Cas9 基因組編輯來(lái)進(jìn)行 KO 驗(yàn)證，從而給大家提供研究所需的可靠結(jié)果。

CRISPR/Cas9介導(dǎo)編碼基因KO的原理，在Cas9剪切DNA導(dǎo)致雙鏈斷裂（DSB）后，細(xì)胞利用非同源末端連接（NHEJ）進(jìn)行修復(fù)。NHEJ修復(fù)會(huì)在DSB位點(diǎn)隨機(jī)引入堿基的插入或者缺失（Indel）。如果這些Indel不是3的倍數(shù)將會(huì)導(dǎo)致后續(xù)的閱讀框發(fā)生移碼，這種移碼往往會(huì)產(chǎn)生提前終止密碼子（premature termination codon，PTC）,導(dǎo)致蛋白功能的喪失（提前翻譯終止的多肽一般會(huì)被降解），從而達(dá)到KO效果。這種技術(shù)在最近幾年實(shí)用性大大增加。這種方法的優(yōu)點(diǎn)在于，它在同一個(gè)細(xì)胞系中提供了陽(yáng)性和陰性的表達(dá)模型。

在 KO 細(xì)胞系中測(cè)試特異性抗體時(shí)，特異性抗體不會(huì)產(chǎn)生信號(hào)，但在野生型 (WT) 細(xì)胞系測(cè)試特異性抗體時(shí)，特異性抗體會(huì)產(chǎn)生特異性靶蛋白信號(hào)。以這種方式，KO 驗(yàn)證作為真正的陰性對(duì)照，以確認(rèn)抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的特異性。
華安生物致力于為全球的科研工作者和工業(yè)客戶提供高品質(zhì)的抗體試劑及抗體服務(wù)，利用基因敲除技術(shù)深入應(yīng)用于抗體產(chǎn)品驗(yàn)證，并將形成KO驗(yàn)證抗體、KO細(xì)胞株、KO細(xì)胞裂解物等多條產(chǎn)品線。

KO驗(yàn)證抗體案例展示

01.Anti-Caspase-3 antibody(ET1602-39)

Western Blot analysis of Caspase-3 on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela Caspase 3 KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (ET1602-39, 1/500) was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody(HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.

02.Anti-NF-kB p65 antibody(ET1603-12)

Western Blot analysis of NF-κB p65 on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela NF-κB p65 KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (ET1603-12, 1/500)was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit Ig-HRP Secondary Antibody (HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.

03.Anti-Vimentin antibody(EM0401)

Western Blot analysis of Vimentin on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela Vimentin KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (EM0401, 1/500) was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody(HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.


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