多肽合成與修飾技術
實驗技術：多肽 合成是一個固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來，經過不斷的改進 和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術，表現(xiàn)出了經典液相合成法無法比擬的優(yōu)點，從而大大的減輕了每步產品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種：固相合成和液相多肽合成。
實驗技術原理：
多肽合成儀以固相合成為反應原理，在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序（序列，一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端）不斷添加、反應、合成，操作最終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕了每步產品提純的難度。為了防止副反應的發(fā)生，參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的，并且在反應之前必須活化。
實驗操作流程：
1、去保護：Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去除氨基的保護基團。
2、激活和交聯(lián)：下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化�；罨膯误w與游離的氨基反應交聯(lián)，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環(huán)：這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成。
3、洗脫和脫保護：多肽從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑（TFA）洗脫和脫保護。
多肽修飾類型：
1、C端標記技術 ：
C端酰胺化（Amidation,C-termainal）、醛基化（Aldehydes）、醇基化（Alcohols）、pNA (p-Nitroanilide)
AMC、AFC、巰基乙胺化（Cysteamide）、酯基化（Ester）、N-烷基化（N-Alkyl Amides）等
2、N端標記技術 ：
乙�；疉cetylated （Acetylated）、Palmytolyl、HYNIC、生物素標記（Biotinylated）、Br乙酰化（Bromoacetylated）
螯合反應（DOTA，DTPA conjugated）、甲醛化（Formylated）、十四烷基、十八烷基化（Myristoylated）
琥珀酰化、棕櫚酸化、蘋果酸化、脂肪酸化等（Succinylated）
3、熒光標記修飾：
C端修飾:AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修飾:Biotin, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-Fam，5-Fitc等
Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA
4、環(huán)化反應：
首尾成環(huán)，中間成環(huán)，特殊成環(huán)（N -> C or Head to Tail）
2對二硫鍵，3對二硫鍵（Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation）
天然產物活性肽成環(huán)（Cyclic-natural peptides ）
5、甲基化修飾：
側鏈甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
N端甲基化（N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val）
6、幾種特殊修飾：
各 種偶聯(lián)（BSA, KLH conjugated peptides for antibody production ）、磷酸化（Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine）、磺化（Sulfated Tyrosine or Serine）、MAPS (Multiple Antigenic Peptide)、糖肽（Glycopeptides）、 PEG修飾（PEGylation）
實驗注意事項：
客戶提供：
1、多肽序列、數量、純度及特殊要求
2、凍干多肽可在-20度保存或室溫保存
3、溶液肽遠比凍干形式不穩(wěn)定，溶液應為中性PH（5-7）-20度保存。
4、為避免樣品的反復凍融，最好分成小樣存放。
實驗技術原理：
多肽合成儀以固相合成為反應原理，在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序（序列，一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端）不斷添加、反應、合成，操作最終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕了每步產品提純的難度。為了防止副反應的發(fā)生，參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的，并且在反應之前必須活化。
實驗操作流程：
1、去保護：Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去除氨基的保護基團。
2、激活和交聯(lián)：下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化�；罨膯误w與游離的氨基反應交聯(lián)，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環(huán)：這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成。
3、洗脫和脫保護：多肽從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑（TFA）洗脫和脫保護。
多肽修飾類型：
1、C端標記技術 ：
C端酰胺化（Amidation,C-termainal）、醛基化（Aldehydes）、醇基化（Alcohols）、pNA (p-Nitroanilide)
AMC、AFC、巰基乙胺化（Cysteamide）、酯基化（Ester）、N-烷基化（N-Alkyl Amides）等
2、N端標記技術 ：
乙�；疉cetylated （Acetylated）、Palmytolyl、HYNIC、生物素標記（Biotinylated）、Br乙酰化（Bromoacetylated）
螯合反應（DOTA，DTPA conjugated）、甲醛化（Formylated）、十四烷基、十八烷基化（Myristoylated）
琥珀酰化、棕櫚酸化、蘋果酸化、脂肪酸化等（Succinylated）
3、熒光標記修飾：
C端修飾:AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修飾:Biotin, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-Fam，5-Fitc等
Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA
4、環(huán)化反應：
首尾成環(huán)，中間成環(huán)，特殊成環(huán)（N -> C or Head to Tail）
2對二硫鍵，3對二硫鍵（Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation）
天然產物活性肽成環(huán)（Cyclic-natural peptides ）
5、甲基化修飾：
側鏈甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
N端甲基化（N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val）
6、幾種特殊修飾：
各 種偶聯(lián)（BSA, KLH conjugated peptides for antibody production ）、磷酸化（Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine）、磺化（Sulfated Tyrosine or Serine）、MAPS (Multiple Antigenic Peptide)、糖肽（Glycopeptides）、 PEG修飾（PEGylation）
實驗注意事項：
客戶提供：
1、多肽序列、數量、純度及特殊要求
2、凍干多肽可在-20度保存或室溫保存
3、溶液肽遠比凍干形式不穩(wěn)定，溶液應為中性PH（5-7）-20度保存。
4、為避免樣品的反復凍融，最好分成小樣存放。
標簽：
多肽合成
