徠卡 101 樣本診斷流程小貼士：第64-72步
徠卡101
組織脫水、透明、浸蠟、包埋
從患者到病理學(xué)家，準(zhǔn)備樣本進(jìn)行診斷需要細(xì)心、經(jīng)驗(yàn)以及合理的流程。
徠卡特地為大家整理了取材、組織脫水、透明、浸蠟、包埋以及染色等（常規(guī)、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡單地獲得實(shí)驗(yàn)方案，避免錯誤的發(fā)生。
步驟六十四
了解染色
🙆 正確：了解你正在做的染色。
🙅 錯誤：只是“跟隨操作方法”，而不是真的知道染色結(jié)束需要觀察什么，可能會導(dǎo)致不夠好的染色結(jié)果。
A.PAs肝染色，正常情況下，脂褐素及糖原PA染色呈陽性，膽汁和含鐵血黃素PAS染色呈陰性（分別為黃色和棕色）。
B.銀 Gomer i染色方法染肺部真菌（曲霉屬）感染。大多數(shù)城市居民和吸煙者肺中的一個共同特征，即真菌的菌絲在非染色情況下都是黑色的。
步驟六十五
使用陽性對照
🙆 正確：總是使用陽性對照片可以清晰的知道，是否包含想要展示的結(jié)構(gòu)/物質(zhì)。
🙅 錯誤：如果我們在玻片中沒有看到想要顯示的結(jié)構(gòu)或物質(zhì)，我們認(rèn)為它是不存在的。
使用Perl’s方法證明肝硬化含鐵血黃素（藍(lán)色）包含鐵。這是一個較好的鐵陽性對照染色。
步驟六十六
使用精確時間
🙆 正確：使用精確時間
🙅 錯誤：時間總是大概。不精確的時間產(chǎn)生不一致的結(jié)果。
這兩張皮膚玻片來自同一塊蠟塊，同樣使用PAS染色。A玻片酸處理（氧化步驟）為5分鐘，而B玻片只有30秒（錯誤）。結(jié)果B玻片基底膜染色效果很差。
步驟六十七
🙆正確：注意使用試劑的保質(zhì)期。部分試劑或染料溶液會漸漸改變，另一些試劑和染料溶液不穩(wěn)定，必須即配即用，還有的需要經(jīng)過一段時間的氧化（成熟）才可以使用。
🙅 錯誤：我們假設(shè)所有的試劑都可用于不確定的周期。
Weigert’s 蘇木素由于過氧化呈現(xiàn)不干凈的染色效果，請注意膠原的棕色染色。
步驟六十八
正確儲存試劑
🙆 正確：正確儲存試劑。有些試劑需要冷藏，因?yàn)槿菀鬃躺婢蛎咕�。有的光敏感試劑，需要在黑暗中儲存�?/p>
🙅 錯誤：“我們所有的試劑都儲存在染色平臺上的架子上。有時我們能在玻片上看到散在的其他有機(jī)物。”
使用長了微生物的染色溶液（蘇木素）對玻片進(jìn)行染色，可見大量外來微生物覆蓋在組織切片頂部。
步驟六十九
遵守染色方法
🙆 正確：認(rèn)真完成程序的每一步。
🙅 錯誤：當(dāng)使用相同的程序時，不同操作人員取得不同的染色結(jié)果。
福爾馬林固定的粘膜下層進(jìn)行馬松三色染色( Masson trichrome)。在正確執(zhí)行染色步驟時，包括第一步鉻酸染色（敏化或二媒染），A玻片呈現(xiàn)紅色的平滑肌。B玻片染色時,這一步被跳過，B玻片中可見肌肉缺乏差異性著色（小腸）。
步驟七十
記錄所有更改
🙆 正確：記錄所有實(shí)驗(yàn)中偏離。
🙅 錯誤：染色結(jié)果不好，卻很難找尋原因，因?yàn)槌绦蜃兓瘯r沒做記錄。
浸銀染色網(wǎng)狀纖維有背景（沉淀），如果染色時沒有精確的執(zhí)行染色步驟，則很難確定引起這樣問題的原因，( Gordon& Sweets染色法，腎臟）。
步驟七十一
🙆正確：注意洗滌步驟。盡可能規(guī)范操作，因?yàn)檫@經(jīng)常引起結(jié)果的變化。
🙅 錯誤：實(shí)驗(yàn)室工作人員使用不同的洗滌方法，有些人使用劇烈的攪拌，另一些則更為溫和。
使用相同的方法進(jìn)行肝染色，唯一的區(qū)別是操作人員沖洗，洗滌步驟。網(wǎng)狀纖維均為黑色，但A比B呈現(xiàn)的更好( Gordon& Sweets法）。
步驟七十二
認(rèn)真設(shè)置顯微鏡
🙆正確：在關(guān)鍵階段，如分化步驟使用顯微鏡在微觀下觀察控制。要注意在玻片濕潤未封片的情況下，顯微鏡的設(shè)置，可能呈現(xiàn)虛假的背景染色。
🙅 錯誤：對所有染色方法都只用裸眼觀察玻片。
A.濕組織(無蓋玻片)在顯微鏡下看關(guān)閉閉聚光器和光闌。注意假背景。
B.濕組織(無蓋玻片)在顯微鏡下看打開聚光器和光闌。注意清晰的背景。
接下來我們將會為大家?guī)砬衅?yōu)化脫蠟和試劑應(yīng)用、考慮抗體交叉反應(yīng)等操作流程小貼士，感興趣的話可以關(guān)注我們徠卡101系列，后續(xù)我們將會為您奉上更詳盡的內(nèi)容。
昊諾斯生物
與實(shí)驗(yàn)室相伴
更專業(yè)·更優(yōu)質(zhì)·更貼心
