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ATS細胞破碎專用設(shè)備在實驗操作中的實用技巧

瀏覽次數(shù):3519 發(fā)布日期:2020-8-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
 

生物工藝過程流程圖


 
 

 

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      如圖所述,細胞破碎是分離純化的關(guān)鍵第一步, 經(jīng)過發(fā)酵得到細胞后,由于目的產(chǎn)物都在細胞的內(nèi)部,需用通過高壓細胞破碎儀,將細胞破碎開,把胞內(nèi)產(chǎn)物釋放出來,后續(xù)的分離純化才好進行。

 

 


 
ATS細胞破碎專用設(shè)備
 

 

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設(shè)計原理與技術(shù)參數(shù): 

    ATS 細胞專用破碎機主要從三個方面對設(shè)備進行專門設(shè)計,用以滿足細胞破碎提取病毒方面的要求:

   1. ATS 專有的內(nèi)置冷卻模塊,可以保證破碎過程中樣品都處在 4 度的低溫狀態(tài)

 

   2. ATS 柱塞設(shè)計為 2 級夾套隔離,可保證與樣品接觸的那部分柱塞不與外界接觸,進一步可保證生產(chǎn)過程中樣品不會染菌,同時設(shè)備可以通蒸汽滅菌,也可以用0.5mol以上濃度的 NAHO 溶液浸泡殺菌。

 

   3. ATS 專門針對哺乳動物細胞破碎設(shè)計的壓力微調(diào)模塊,破碎壓力可以精準調(diào)節(jié),精度可達到 1bar,調(diào)節(jié)后的壓力波動范圍在±5bar內(nèi),可以保證壓力穩(wěn)定,不會破壞病毒的結(jié)構(gòu)。

細胞破碎關(guān)鍵技術(shù)細節(jié)

破碎率控制

      不同的細胞所需要的破碎壓力都不一樣,ATS 高壓細胞破碎的壓力可以從 0-2000bar 自由調(diào)節(jié),可以滿足幾乎所有常用表達體系的細胞破碎的需求。

溫度控制

      由于破碎過程中隨著壓力的升高,樣品溫度也會升高,當壓力每升高 100bar,樣品的溫度會升高 2.2℃,生物樣品都需要保持低溫才能保證樣品的活性,ATS 專業(yè)的內(nèi)置冷卻模塊,可通 4℃的冷凍水直接在樣品破碎產(chǎn)熱點對樣品降溫,所產(chǎn)生的熱量瞬間就會被吸走,可保證樣品溫度一直處在低溫狀態(tài),樣品活性不受影響。

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典型細胞破碎介紹


 
 
 

大腸桿菌破碎介紹/典型應(yīng)用:

     大腸桿菌一般需要800-1000bar的壓力破碎2-3遍,破碎率可以達到99%以上,常見的典型應(yīng)用:胰島素 、干擾素、 白介素 酶等。


 
 

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酵母菌破碎介紹/典型應(yīng)用:

   酵母菌一般需要1300bar的壓力破碎3-4遍,破碎率可以達到 90%以上,常見的典型應(yīng)用:HPV疫苗、諾如病毒疫苗、乙肝疫苗、手足口病疫苗等。


 
 
酵母前.png
 
 
 
 
 
 
酵母后.png
 

 動物細胞破碎介紹/典型應(yīng)用:


 
 
       哺乳動物細胞主要成分是細胞膜,比較好破碎,一般500bar以內(nèi)的壓力破碎一遍都可以破碎的比較好,因為表達病毒所耐受的壓力不同所以破碎壓力也不太一 樣,破碎壓力一般 20bar到500bar。高壓破碎儀不光可以破碎細胞,還可以將細胞內(nèi)部的粘性細胞液,團聚的病毒等均質(zhì)分散開,可為后續(xù)工藝做鋪墊,提高病毒的收率。常見的典型應(yīng)用:水痘疫苗,甲肝疫苗,輪狀病毒疫 苗,溶瘤病毒(腺病毒,腺相關(guān)病毒,單純皰疹病毒等) 以及一些常見的動物用的滅活病毒疫苗。
 
 
 
 
 

 

 


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