8月13日晚上七點，賽業(yè)生物云課堂開始了主題為“ACE2小鼠模型在中和抗體和疫苗研發(fā)中的應用”的第七期課程，需要課件的老師可以關注“賽業(yè)生物訂閱號”，后臺留言“007”。針對答疑環(huán)節(jié)未及時解答的問題，我們進行了收集整理，下文為劉璐博士針對答疑環(huán)節(jié)提出的問題給出的詳細解答。

Q1:想知道新型冠狀病毒的入侵機制是什么？

A1: 就目前的調研來看，新冠病毒的主要入侵方式是通過呼吸道感染，空氣傳播為主要形式，病毒通過呼吸系統(tǒng)進入機體，從上呼吸道逐漸入侵下呼吸道，突破黏膜屏障進入到肺部，造成肺部感染，而肺部的免疫反應不足以將病毒消滅，于是病毒通過與肺部細胞表達的ACE2受體結合，利用ACE2這個鑰匙打開了細胞之門，闖入了有營養(yǎng)的環(huán)境進行自身的瘋狂復制，細胞破裂，病毒釋放出細胞再尋找下一個目標，使得機體最開始表現(xiàn)為肺部器官的病理變化，而一旦病毒占據(jù)了優(yōu)勢之后，免疫系統(tǒng)就會啟動最大限度保護機制用以免除病毒的進一步攻擊，這個想法雖美好，但也存在相當大的風險，此時炎性分子開始分泌紊亂，炎癥因子表達失調，于是引發(fā)炎癥因子風暴，進而造成其它器官組織的衰竭，最終對機體造成毀滅性的傷害。而也有文獻表明，病毒除了通過呼吸道入侵之外，還可以通過胃腸道感染的方式進入機體。病毒入侵之后的免疫機制與呼吸道感染相似，最終目的是讓自身得以存活。

Q2: 想了解腫瘤免疫中的抗體依賴感染增強的知識以及相關小鼠的信息？

A2: 一般抗體依賴感染增強是與疫苗的使用相關，也就是說抗原屬于病毒或者類似物，那么對于腫瘤免疫來說，用抗體依賴感染增強的說法似乎不太合適，我們指導腫瘤免疫治療是通過主動或被動方式使機體產(chǎn)生腫瘤特異性免疫應答，使腫瘤生長被抑制或者被殺傷，從而起到治療的作用。而腫瘤免疫逃逸是腫瘤細胞通過多種機制逃避機體免疫系統(tǒng)的識別和攻擊，從而得以在體內(nèi)生存和增殖的現(xiàn)象。結合這幾個概念，那么抗體依賴感染增強似乎與腫瘤免疫逃逸相關，從這個角度來講，可以這樣理解，腫瘤抗原在與抗體藥物形成復合物之后，免疫系統(tǒng)不會直接將其清除，而是將復合物呈遞到相應的細胞中，增強抗原的存活和增殖能力。

在腫瘤免疫的研究中，小鼠模型的地位也是相當重要的，隨著基因工程技術的發(fā)展和成熟，對小鼠進行基因編輯已經(jīng)成為了研究基因功能的重要手段，而在小鼠體內(nèi)過表達某些致癌基因或者敲除某些抑癌基因可以導致小鼠易發(fā)腫瘤，從而制備腫瘤模型。同時，將人的腫瘤移植到小鼠體內(nèi)建立人源化腫瘤模型，為了最大限度的消除免疫排斥反應，需要用到免疫缺陷小鼠。這些小鼠模型對于腫瘤免疫的研究都是相當有用的。比如我們構建的一些特異性免疫檢查點小鼠模型，就可以進行腫瘤免疫相關的一些研究。

Q3: ADE去除是哪些突變位點？中和抗體人體內(nèi)半衰期多長？

A3: 許多病毒在感染過程中都可能存在ADE作用，目前最常見引發(fā)ADE現(xiàn)象發(fā)生的原因是由抗體Fc結構受體介導的。IgG Fc受體是免疫應答中重要的膜性調節(jié)分子，根據(jù)胞內(nèi)區(qū)域特征可以分為激活型受體和抑制性受體，任何哺乳動物的IgG Fc 受體又有三類，分別是FcγR I、FcγR II、FcγR III，即我們通常所說的CD64、CD32和CD16。而FcγR II的親和力相對來說比較低，不能結合IgG單體，只能結合IgG復合物或者多聚IgG，針對于不同的Fc糖基化修飾，其對受體的親和力也不相同，因此，在研究中需要根據(jù)不同的研究目的進行分析。

不同抗原產(chǎn)生的抗體半衰期是不一樣的，但是可以通過一定的手段延長抗體在體內(nèi)的半衰期來提高抗病毒效應，例如抗體藥物分子量大小、高等電點、糖基化修飾、FcRn結合等等因素均可影響到抗體的半衰期，因此沒有一個固定的說法。

Q4: 人源化ACE2的B6和BALB/C的區(qū)別？

A4: 其實對于人源化ACE2來說，用哪種小鼠都可以，但是如果考慮到不同的實驗目的，那么用哪種品系的小鼠還是需要進行選擇的，我們知道B6小鼠最大的特點是品系穩(wěn)定并且易于繁殖，而且B6這個品系的小鼠是第一個完成基因組測序的小鼠品系�？偟恼f來，如果用于生理病理學研究，用C57B6小鼠更合適些。BALB/c小鼠相對來說就溫順很多，當然也有易于繁殖的優(yōu)點，同時雌雄體重差異較小，對于致癌物極其敏感，建立癌癥模型比較多，因此BALB/c小鼠多用于癌癥治療和免疫學研究中�？偟膩碚f，真要在哪種品系的小鼠中選擇一種的話，就根據(jù)自身的實驗目的進行參考。針對新冠病毒的研究，我們建立了多種人源化ACE2小鼠模型，其目的也是為了滿足不同的科研需求，但就目前來看，似乎BALB/c背景的ACE2小鼠對病毒的感染表現(xiàn)出更強的敏感性。

Q5: 劉老師，這些藥效圖是用什么設備跑出來的，是細胞儀嗎，什么名稱？

A5: 這篇文章是參考謝曉亮實驗團隊Potent Neutralizing Antibodies against SARS-CoV-2 Identified by High-Throughput Single-Cell Sequencing of Convalescent Patients’ B Cells這篇文獻，發(fā)表于cell上，這圖片展示的是噬菌斑減少中和試驗(Plaque reduction neutralization test PRNT)結果，用于檢測中和抗體的中和效價。不是直接用設備出圖，而是先做實驗處理，然后利用GraphPad Prism 8.0（GraphPad Software Inc.）軟件進行參數(shù)邏輯回歸分析來確定IC50值做出曲線圖。以上可以參考該文獻附屬材料中提到的具體實驗操作方法。
 

溫馨提示

賽業(yè)生物云課堂針對冠狀病毒、人源化小鼠、細胞培養(yǎng)、神經(jīng)科學等主題開展了一系列課程，錯過直播的老師可以通過以下方式進行回看：

1. 搜索【賽業(yè)生物】進入賽業(yè)官網(wǎng)點擊【賽業(yè)大講堂】—【賽業(yè)公開課】，即可觀看往期課程。

2. 關注“賽業(yè)生物訂閱號”，點擊菜單賽業(yè)課堂—公開課，即可觀看往期課程。

3. 在B站搜索“賽業(yè)生物”，關注我們，即可觀看我們往期的課程。