從時間成本，金錢成本，以至于感情投入角度來評判，論實(shí)驗室常規(guī)的基礎(chǔ)實(shí)驗?zāi)囊粋�具備最低的投入產(chǎn)出比，相信大家都會選擇Western Blot實(shí)驗 。各位正在科研道路上奮戰(zhàn)或者已經(jīng)成功打怪升級的同學(xué)們細(xì)數(shù)一下那些年你做的Western Blot，再數(shù)一下最后發(fā)表文章用到的Western Blot結(jié)果圖，相信比例低于1%的不在少數(shù)。
 

那么緣何Western Blot具有如此低下的投入產(chǎn)出比呢？仔細(xì)品品，Western Blot實(shí)驗并非是一個非常復(fù)雜的實(shí)驗，然而影響因素卻極其多，其中有些是可控的，有些是需要經(jīng)驗判斷的，而有些只是需要留意實(shí)驗操作細(xì)節(jié)，就能夠做好的。而整個流程中，大家往往會非常重視那些不可感知的實(shí)驗條件，通過標(biāo)準(zhǔn)化的流程固定參數(shù)，以減少實(shí)驗組和樣品之間的偏差，比如樣品的獲取過程，通常會固定裂解液的種類，用量，時間等等因素；比如電泳過程，通常會固定電壓或電流，并通過預(yù)染maker的指示固定電泳的總時間，也可以通過購買預(yù)制膠減少電泳膠批次之間的誤差；比如轉(zhuǎn)膜和曝光，也可固定操作時間盡量減少誤差。但是這其中，最簡單的操作部分，卻往往被忽視了，那就是封閉，洗滌和抗體孵育部分。

諸如上樣，電泳，轉(zhuǎn)膜，曝光流程，這些步驟的實(shí)驗相對比較獨(dú)立，不受其他人實(shí)驗的干擾，且通常是一次性的步驟，大家往往會遵守嚴(yán)格的操作流程。而封閉，洗滌和抗體孵育部分，由于是多次反復(fù)的操作，且經(jīng)常和其他實(shí)驗室人員共享搖床平臺，因此往往很難固定一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。比如，實(shí)驗室很多的簡易搖床并無控制振蕩速度和頻率的按鈕和參數(shù)；比如在封閉或孵育的時候遇到其他人員需要洗滌而對搖床的速度進(jìn)行了調(diào)整，反之亦然；比如洗滌過程中沒有固定洗滌液的體積而是隨意倒入一定的量，甚至有時候倒入洗滌液的時候直接沖擊在膜上；比如多次洗滌的時間間隔不統(tǒng)一，有時候因需要配合其他實(shí)驗的安排而延長/縮短洗滌時間，或者增加/減少洗滌次數(shù)等等。由于Western Blot實(shí)驗的封閉、洗滌和抗體孵育的效果很大程度上取決于時間，分子擴(kuò)散，液體交換效率等因素，因此上述各種條件的不統(tǒng)一，綜合下來會影響封閉的效果，抗體結(jié)合的效率和特異性，背景的干凈程度。雖然每次實(shí)驗都會以內(nèi)參來衡量不同樣品之間的差異，但是多次實(shí)驗之間卻因為以上各種因素的不統(tǒng)一，導(dǎo)致較大的實(shí)驗偏差。因此將以上多次反復(fù)的簡單操作進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，可極大提高Western Blot的穩(wěn)定性，減少重復(fù)次數(shù)。

除此之外，封閉，洗滌和抗體孵育部分也是整個Western Blot中最耗時但卻沒有技術(shù)含量的部分，通常這幾個步驟的總時間會占用Western Blot的1/2以上，并且在這期間，需要研究人員時刻待命進(jìn)行抗體和洗滌液的更換，嚴(yán)重影響了進(jìn)行其他實(shí)驗的安排。并且基于以下2個原因，很多人選擇一抗過夜，將Western Blot分成2天之內(nèi)完成。其中一個原因是擔(dān)心抗體的特異性不行，背景高，因此選擇低溫孵育過夜以提高特異結(jié)合和降低非特異背景；第二個原因是第一天進(jìn)行整個Western Blot的實(shí)驗流程會導(dǎo)致做到晚上很晚的時間。通常一抗孵育過夜之后，第二天早上進(jìn)行洗滌，二抗孵育，洗滌，曝光，往往要到中午或者午飯后才能出結(jié)果，然后再決定當(dāng)日是否需要繼續(xù)調(diào)整樣品重新進(jìn)行新一輪的Western Blot實(shí)驗，其中留給數(shù)據(jù)分析和思考如何優(yōu)化下一步流程的時間比較少，因此容易陷入未經(jīng)詳細(xì)思考，便倉促進(jìn)入下一個實(shí)驗流程的惡性循環(huán)中。

那么如何解決以上關(guān)于封閉，抗體孵育和洗滌這類簡單的重復(fù)勞動帶來的對整個Western Blot流程和結(jié)果的影響呢？唯一的解決方案就是對這幾個步驟進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和自動化，以減少人工的干預(yù)，以及有效利用凌晨的時間。目前市場上推出不少可解決這些問題的小型自動化設(shè)備，比如美國Cellagen Technology公司的Flexiwash FW400

點(diǎn)擊此鏈接觀看實(shí)驗操作視頻https://v.qq.com/x/page/b0927otglfx.html）

FlexiWash FW400自動化免疫雜交系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了對繁瑣耗時的Western blots膜的孵育和洗滌過程的自動化和標(biāo)準(zhǔn)化過程。在蛋白被轉(zhuǎn)移到雜交膜上之后，可將雜交膜裝載到FlexiWash FW400工作站中進(jìn)行自動封閉、孵育和洗滌循環(huán)。實(shí)驗人員僅需要準(zhǔn)備相應(yīng)體積的試劑，啟動免疫雜交流程，即可讓FlexiWash FW400完成剩下所有的工作，直至曝光前。獨(dú)有的液體處理設(shè)計，使得FlexiWash FW400支持4批樣品的同時孵育/洗滌，每個樣品可獨(dú)立進(jìn)行編程，互不干擾。
 
節(jié)約時間和成本

• Load-and-go一鍵調(diào)用模板，無人值守的快速孵育和洗滌過程。
• 將人工操作時間降低到幾分鐘，再也不用時時刻刻守著Western blots。
• 自動回收珍貴試劑（比如一抗、二抗、封閉液等）進(jìn)行重復(fù)利用。
• 帶有溫控模塊，可一抗低溫過夜。

高度靈活

• 單個程序可設(shè)置多達(dá)7步孵育/洗滌流程。
• 每個步驟可編輯當(dāng)前所需用的試劑來源、體積、孵育/洗滌時間以及循環(huán)次數(shù)。
• 友好的用戶界面：大視野LCD觸摸屏用于編輯程序和顯示狀態(tài)。
• 三種不同規(guī)格尺寸的抗體孵育盒，兼容各種類型、大小的膠和膜。

FlexiWash FW400操作界面
更好的Western Blot 結(jié)果

• 可重復(fù)性好：減少了人工操作流程中孵育/洗滌時間和加入液體體積的隨意性。
• 方便優(yōu)化條件：可平行比較4種不同的雜交條件，如：不同的封閉試劑，抗體稀釋度，孵育時間，洗滌次數(shù)等。

通過以上的自動化操作，不僅可以實(shí)現(xiàn)對封閉，抗體孵育和洗滌的自動化和標(biāo)準(zhǔn)化，極大釋放科學(xué)家的時間，可以專注于數(shù)據(jù)分析，文獻(xiàn)閱讀和更高級的實(shí)驗中，并且有效利用晚上和凌晨的時間進(jìn)行操作，第二天早上到達(dá)實(shí)驗室后可直接進(jìn)行曝光和數(shù)據(jù)分析，可以從容地進(jìn)行第二輪實(shí)驗的優(yōu)化設(shè)計和實(shí)施。


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