Ames試驗的類型
瀏覽次數(shù):1682 發(fā)布日期:2020-2-19
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Ames試驗是由由美國加利福利亞大學伯克利分校生化系B.N.Ames教授實驗室在1975年建立的鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗,從建立到后來的不斷完善,現(xiàn)在Ames試驗被廣泛應用于化合物的致突變性和潛在致癌性的初篩檢驗。為了對Ames試驗有更多的了解,特收集整理了網(wǎng)上的資料,對Ames試驗的類型進行了盤點。
Ames試驗是利用鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸 (histidine)營養(yǎng)缺陷型突變株發(fā)生回復突變的性質(zhì),對化學物質(zhì)致突變性進行初步篩選的短期體外試驗方法。在GLP試驗用標準Ames試驗,而在藥物篩選早期常用的試驗有Mini-Ames試驗、Micro-Ames試驗、AmesII試驗等,特點是用藥量少。可檢測基因突變的Ames試驗與檢測DNA損傷的體外彗星試驗,考察染色體異常的體外微核試驗等結(jié)合在一起,評價化合物的體外遺傳毒性,探討毒性作用機制,為該化合物毒性的防治提供理論依據(jù)。美迪西建立了符合國際標準的藥物安全評價體系,實驗研究遵循ICH、CFDA、FDA和OECD指導原則,可為客戶提供高質(zhì)量的數(shù)據(jù)、快速的研究周期的臨床前藥物安全性評價服務。
1、Mini-Ames試驗
通過收集整理網(wǎng)上的資料得到了Mini-Ames試驗的一些資料。Mini-Ames試驗即微型的Ames試驗,試驗方法同標準Ames試驗相同,可以用于藥物的早期開發(fā)和篩選,是一種對于藥物的遺傳毒理的檢測比較可靠的方法。與標準Ames試驗的100mm細胞培養(yǎng)皿相比,Mini-Ames試驗用六孔細胞培養(yǎng)板板替代平皿。Mini-Ames試驗的實驗為一周,周期短,供試品需求量和試劑耗材少,用量約為Ames試驗的20%。而且Mini-Ames試驗篩選效率高,可以在同一實驗方案中同時篩選多個供試品。
2、Micro-Ames試驗
Mini Ames試驗或者Micro Ames試驗通常選擇2個菌株(即TA98和TA100,可檢測98%致突變劑),為了消除另外2%的可能性,可選擇與標準Ames試驗相同的5個菌株。
3、AmesII試驗
AmesII試驗又稱為Ames波動試驗,由Gee等通過開發(fā)新的菌株,并改進傳統(tǒng)Ames試驗方法,開發(fā)出的新的Ames試驗。在實驗方法上,AmesII試驗采用了液態(tài)微孔板培養(yǎng)方法,摒棄了試驗所用的固態(tài)瓊脂平板培養(yǎng)方法。即在微孔板中進行受試物和菌株的孵育,利用培養(yǎng)基中的特殊指示劑溴甲酚紫,當孔中有回復突變的菌株生長,使培養(yǎng)基pH值降低時,該指示劑由紫色變?yōu)辄S色。利用酶標儀在特定波長進行掃描,可記錄培養(yǎng)基為黃色孔的數(shù)量,也即反應出受試物的致突變性。全過程可以全自動由機器完成,真正實現(xiàn)了高通量化。
AmesII試驗使用菌株TA98和混合菌株TA7001至7006,將細菌與受試物預培養(yǎng)及一系列稀釋后,在30℃培養(yǎng)過夜,然后接種到各有選擇性試劑5-FU及pH敏感劑溴甲酚紫的384孔上,通過紫外分光光度計檢測培養(yǎng)基變黃的程度來判斷受試物致突變性。
不同類型的Ames試驗其優(yōu)缺點不同,可能需要改進和完善的還有很多。但隨著科學技術尤其是分子生物學領域的快速發(fā)展,遺傳毒性早期快速評價方法也在不斷發(fā)展和完善中,為藥物研發(fā)提供了很多的助力。