Western blot方法是生物實驗室常用的蛋白檢測方法之一,自從1979提出至今已有數十年的歷史。常用的檢測方法有化學發(fā)光法和熒光方法。NIR近紅外熒光檢測方法,印跡膜自發(fā)熒光較低,信噪比高。NIR熒光檢測能獲得高信噪比和高質量圖片主要依賴于激發(fā)強度大,精密的激光光源和專業(yè)的光學元件。我們Azure C500和600成像系統(tǒng)帶有雙激光光源,我們來看下激光光源能給我們帶來哪些好處。
1. 激光光源更容易達到染料的吸收峰
2.窄光譜激光減少光泄漏的產生
3.激光檢測在更短時間內實現更高信噪比
4.激光檢測具有較低的背景
如果您有帶有激光激發(fā)的近紅外熒光成像系統(tǒng),那么您還可以進行很多其他實驗哦,如下但不限于:
◐ 雙色印跡膜成像:用于精準定量,滿足期刊雜志需求
◐ in-cell western檢測實驗:傳統(tǒng)的western blot對于一些大分子量的蛋白檢測具有局限性,近紅外染料的問世,可以在細胞培養(yǎng)板上進行in-cell western檢測,省去了電泳,轉膜等等繁瑣的步驟,根據孵育二抗所發(fā)出熒光信號進行檢測;還可以用于藥物篩選,FDA已經規(guī)定胰島素和一些抗腫瘤藥物的體外效價評價標準使用此方法
◐ EMSA(凝膠遷移或電泳遷移率檢測)實驗:紅外熒光技術可以解決EMSA實驗中探針示蹤問題,還可以進行雙色標記檢測競爭性結合;
◐ 活體成像:近紅外熒光染料具有良好的組織滲透性、無毒性和無放射性等特點,可以真正無損傷的研究活體動物體內腫瘤的生長及轉移,感染性疾病發(fā)生發(fā)展過程或者監(jiān)控活體生物體內的細胞活動和基因表達,有效的研究觀測轉基因生理過程等。在這點上別拿我們家寶寶與輕(zhuan)奢(yong)品(jiqi)比,你懂的。
◐ 組織切片成像:使用IRDye®抗體或熒光探針,根據標準的免疫組織化學實驗協(xié)議進行標記,可以在宏觀層面上進行實驗分析,組織切片紅外成像優(yōu)勢在于可以在使用顯微鏡之前宏觀快速瀏覽感興趣的部分;可進行兩通道標記,進行多重標記檢測;可對染色部位進行定量分析等。
◐ 微印跡分析(micro-western arrays):能夠將western blot的特異識別能力和DNA芯片檢測的高通量能力結合起來,幫助實驗者一次實驗可觀測到細胞中各種蛋白之間的網絡系統(tǒng),節(jié)省每次反復實驗的人力和物力。這種方法是利用預制的micro-western膠(包含96個微膠)來預印細胞裂解物,進行半干式轉印,將樣品轉移到NC膜上或PVDF膜上,進行封閉,近紅外二抗孵育,使用近紅外成像系統(tǒng)進行成像,這種新技術,可用極少樣品和抗體分析大量數目不同蛋白的變化,極適合研究干細胞、癌細胞、組織發(fā)育等過程中的信號傳導路徑的變化。