原代細胞復蘇方法
瀏覽次數(shù):290 發(fā)布日期:2019-9-16
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原代細胞復蘇方法
啊,秋雨把梧桐樹的衣裳打黃啦,給秋天添上了一身神秘的彩裝。秋天來了,天高云淡,蔚藍的天空中,大雁成群結隊地飛往南方,它們有時排著“一”字形,有時排著“人”字形。接下來介紹原代細胞復蘇方法.
1、從液氮中取出原代細胞冷凍管,迅速投入37~38 ℃水浴中,其間可以輕輕轉動細胞,加快融化速度,大約需要1分鐘時間。
2、5分鐘內用培養(yǎng)基稀釋至原體積的10倍以上,加入培養(yǎng)瓶中,再用1ml培養(yǎng)基洗滌細胞凍存管,保證細胞都被加入培養(yǎng)瓶中,靜置于孵箱,12-16小時后更換培養(yǎng)基(除去DMSO)。以后每2天換一次液,保證細胞狀態(tài)良好。
原代細胞傳代方法:酶消化法
當細胞生長至70-80%左右可以傳代,傳代比例以1:2或1:3為佳。具體方法如下:
1、棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,用PBS洗滌培養(yǎng)瓶2遍,加入0.25%的胰酶消化液(Trypsin-EDTA,ScienCell品牌,貨號0103),以消化液能覆蓋整個瓶底為準。37度孵育4分鐘左右,輕拍培養(yǎng)瓶側面,顯微鏡下觀察細胞消化情況,直到80%細胞呈現(xiàn)圓形。
2、細胞消化好后,加入胰酶中和液(TNS,ScienCell品牌,貨號0113),并輕輕搖動培養(yǎng)瓶,形成細胞懸液,然后將細胞和培養(yǎng)基轉移至離心管中,1000rpm離心5分鐘。
3、棄去上清液,以1-2ml新鮮培養(yǎng)基重新懸浮細胞并吹打均勻,接種于包被好的新培養(yǎng)瓶中,瓶中已有10ml左右的培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每2天更換培養(yǎng)基。