第12-19步

徠卡101

取材

從患者到病理學(xué)家，準(zhǔn)備樣本進(jìn)行診斷需要細(xì)心、經(jīng)驗(yàn)以及合理的流程。

 

徠卡特地為大家整理了取材、組織處理、包埋、切片以及染色等（常規(guī)、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡(jiǎn)單地獲得實(shí)驗(yàn)方案，避免錯(cuò)誤的發(fā)生。

 

步驟十二

檢查固定的狀態(tài)

🙆 正確：先進(jìn)行樣品固定狀態(tài)的檢查，特別是大樣本；

🙅 錯(cuò)誤：樣品沒(méi)有檢查固定的狀態(tài)就直接進(jìn)行脫水。
 

容器中的樣本需及時(shí)檢查固定狀態(tài)，以確保合適的固定。

 

步驟十三

制備薄片

🙆 正確：大標(biāo)本需切成薄片（厚約3-4 mm）且厚度要均一，質(zhì)地致密的組織尤其重要；

🙅 錯(cuò)誤：切片厚度≥6mm，厚度不均一。

圖示為腫塊脫水切片�。�2-3mm）且均一。此切片能進(jìn)行有效的脫水并且易于切成蠟片。

 

步驟十四

避免樣本損傷

🙆 正確：仔細(xì)處理樣本，特別是沒(méi)有充分固定的組織樣本（輕拿、不擠壓、使用鋒利的刀片）；

🙅 錯(cuò)誤：樣品沒(méi)有考慮到固定的狀態(tài)就隨便拿取，有時(shí)候還使用鈍的刀進(jìn)行取材。

H&E染色的肺：使用鉗子隨意夾取組織，引起組織局部有明顯的損傷。新鮮的或者固定不充分的組織很容易受損，即使是一些固定充分的組織也會(huì)因隨意夾取而受損。

 

步驟十五

避免交叉污染

🙆 正確：每一個(gè)樣本都放在干凈的器皿里，避免樣本和樣本間的交叉污染；

🙅 錯(cuò)誤：不同組織樣本在取材的時(shí)候，取材板不干凈，這會(huì)導(dǎo)致不同樣本間的交叉污染。尤其是前后進(jìn)行同一類型標(biāo)本取材時(shí)尤其重要，如果發(fā)生攜帶污染可能會(huì)將惡性組織混入良性組織中。

H&E染色肺：含有肝的碎屑，在取材過(guò)程中被污染的。

 

步驟十六

小心使用活檢墊

🙆 正確：新鮮或者固定不充分的樣本沒(méi)有包在泡沫活檢墊中，特別是空心針活檢（避免活檢墊的人工損傷）；

🙅 錯(cuò)誤：有時(shí)候小的、新鮮的或者固定不充分的樣本被放在活檢墊中，然后裝入包埋盒進(jìn)行固定，這會(huì)引起典型的人工“假象”。

新鮮的或者固定不充分的組織在脫水過(guò)程中使用泡沫活檢墊，活檢墊會(huì)對(duì)組織產(chǎn)生局部壓力，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化，形成可見的三角空間結(jié)構(gòu)。

 

步驟十七

選擇合適的包埋盒

🙆 正確：不同類型的組織樣本使用合適的包埋盒進(jìn)行脫水。組織碎片在脫水過(guò)程中容易皺縮，如果包埋盒過(guò)大的話，碎片會(huì)漏到脫水試劑中，甚至轉(zhuǎn)移到其他樣本中；

🙅 錯(cuò)誤：“一種大小滿足所有”：一個(gè)包埋盒放置所有大小的樣本。

A. 一些小的組織碎片從包埋盒中漏出，脫水過(guò)程（組織會(huì)發(fā)生皺縮）該現(xiàn)象特別容易發(fā)生；
B. 合適大小的包埋盒放置合適大小的組織。

 

步驟十八

避免包埋盒超載

🙆 正確：從不讓包埋盒超載，如果組織太大的話，使用第二個(gè)包埋盒；

🙅 錯(cuò)誤：組織充滿包埋盒，這會(huì)阻礙脫水試劑的流通，導(dǎo)致脫水效果差。有時(shí)可能導(dǎo)致樣本變形。

圖中包埋盒都超載了，如果繼續(xù)進(jìn)行脫水的話，有可能導(dǎo)致樣本變形或者脫水不充分。

 

步驟十九

準(zhǔn)確、清楚地標(biāo)記包埋盒

🙆 正確：為了更準(zhǔn)確地識(shí)別樣本，包埋盒必須進(jìn)行清楚的標(biāo)記；

🙅 錯(cuò)誤：有時(shí)候很難去辨識(shí)包埋盒上的標(biāo)記，只能猜測(cè)其內(nèi)容。

A. 標(biāo)記模糊不清的包埋盒均不能使用；

B. 徠卡打號(hào)機(jī)處理的包埋盒標(biāo)記清晰可辨。

 

接下來(lái)我們將會(huì)為大家?guī)��?lái)組織脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色等操作流程小貼士，感興趣的話可以關(guān)注我們徠卡101系列，后續(xù)我們將會(huì)為您奉上更詳盡的內(nèi)容。

 

 

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