YSY Biotech 基因的故事   讓斑馬魚來為您講述
 
樣品，防止污染）；加樣完畢后，將 PCR 管快速離心，確保溶液和組織或細(xì)胞均位于 PCR 管
 
底部；
 

• 制備基因組模板

 

• PCR 管放入 PCR 儀中，啟動(dòng) PCR 程序：65℃×30min、95℃×5min、16℃×1min�；�因組

 
模板若不立即使用，請放入-20℃保存。
 
3、目標(biāo)基因的 PCR 擴(kuò)增（以下試劑請自備）
 
3.1 取用新的 PCR 管，按下列順序組裝 PCR 反應(yīng)體系：
 
20 ml 反應(yīng)體系（產(chǎn)物直接凝膠電泳進(jìn)行基因型鑒定用）
 
基因組 DNA 模板（步驟 2.2 所得）：1 ml
 
2 × PCR Master Mix：10 ml（自備）
 
正向引物（5mM）： 1ml （自備）
 
反向引物（5mM）： 1ml （自備）
 
超純水：   7 ml（自備）
 

• 組裝完畢后，將 PCR 管快速離心，確保所有溶液均位于 PCR 管底部；

 

• 將 PCR 管放入 PCR 儀中，啟動(dòng)客戶自行設(shè)計(jì)的 PCR 程序完成 PCR 擴(kuò)增。

 
4、PCR 產(chǎn)物驗(yàn)證
 
取 2ml 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行基因型鑒定；若需進(jìn)一步測序，可將余下的產(chǎn)物直接送測
 
序；若需酶切鑒定，則在經(jīng) PCR 產(chǎn)物純化試劑盒純化后，用核酸酶內(nèi)切酶進(jìn)行酶切鑒定。
 
注：測序公司一般額外收取 5 元錢的切膠費(fèi)用，請?jiān)谒蜏y前和測序公司確認(rèn)無需切膠回收。
 
5、結(jié)果閱讀（基因突變及突變率分析）
 
如果基因型可由引物特異性識別，則通過將觀測 PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果確定基因型；通過測序確定基
 
因型的，其測序結(jié)果可通過人工閱讀測序的色譜圖，識別突變等位基因的基因型，確定突變率。核
 
酸內(nèi)切酶酶切結(jié)果可通過對凝膠電泳條帶的灰度分析，確定突變率。

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