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活體成像在過量表達(dá)SoCYP85A1基因的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):5406 發(fā)布日期:2019-7-19  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

黑脛病是煙草生產(chǎn)中危害最大的病害之一。

近期,來自青島農(nóng)業(yè)大學(xué)的研究人員從菠菜中克隆了一個(gè)新的細(xì)胞色素抗性基因SoCYP85A1。該基因在煙草中的過表達(dá)顯著增強(qiáng)了煙草對黑脛病的抗性,但不同轉(zhuǎn)基因株系的抗性水平不同。

在轉(zhuǎn)基因植株中檢測到油菜素甾酮castasterone (CS) 的大量積累。而且,SoCYP85A1對轉(zhuǎn)基因株系的抗氧化酶活性也有促進(jìn)作用。此外,CS含量的變化導(dǎo)致植物內(nèi)源激素穩(wěn)態(tài)受到干擾。

研究結(jié)果表明,SoCYP85A1可以在轉(zhuǎn)錄水平通過調(diào)節(jié)防御酶的活性以及與植物內(nèi)源激素的相互作用,參與煙草對黑脛病菌的防御反應(yīng)。因此,SoCYP85A1可以作為提高煙草和其他經(jīng)濟(jì)作物對黑脛病抗性的潛在候選基因。

文章以題為: Overexpression of SoCYP85A1 Increase the Accumulation of Castasterone and Confers Enhanced Black Shank Tolerance in Tobacco Through Modulation of the Antioxidant Enzymes' Activites 于3月22日發(fā)表在frontiers in Plant Science上。

其中,SoCYP85A1被插入到pB7WG2D,1-GFP作為創(chuàng)建過表達(dá)的矢量,T4代轉(zhuǎn)基因煙草通過PCR和Vilber公司的Newton 7.0 植物活體成像進(jìn)行了雙重驗(yàn)證。

FIGURE 1 | Molecular identification of transgenic tobacco lines. (A) PCR analysis of genomic DNA with specific primers for the ORF of SoCYP85A1. (B) GFP analysis of transgenic lines. (C) RT-PCR analysis of WT and different transgenic lines. M, Molecular marker; WT, Wild type; P, Plasmid; 1–8: transgenic lines.

Newton 7.0植物活體成像,除可用于轉(zhuǎn)基因檢測外,還可以用于微生物侵染,基因表達(dá)調(diào)控,植物抗逆性研究,突變體篩選,植物發(fā)育等相關(guān)研究。

主要特點(diǎn):

1、-90℃深度制冷CCD相機(jī),搭載f0.70超級鏡頭,針對Luc報(bào)告基因,具有極高的檢測靈敏度;

2、GFP專用的激發(fā)光源和濾光片,有效地避免了葉綠素自發(fā)熒光的干擾;

3、雙載物臺(tái)設(shè)計(jì),可Z軸升降,便于調(diào)整視野大小

4、盆栽專用載物臺(tái),可放置不同大小的樣品盆,且可進(jìn)行多角度旋轉(zhuǎn),避免了葉片之間的遮擋,獲得更加理想的結(jié)果

5、可直接拍攝彩色圖片,獲得綠色植物原圖,方便進(jìn)行信號(hào)和明場圖像的對比

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