干貨帖 | 高分辨質(zhì)譜Orbitrap直擊靶標(biāo)代謝組學(xué)新熱點(diǎn)
在生命科學(xué)奇妙世界里，基因、核酸、蛋白和小分子代謝產(chǎn)物構(gòu)成了細(xì)胞生命活動(dòng)的基本要素，以這些物質(zhì)為基礎(chǔ)的諸多組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，推動(dòng)著生命科學(xué)研究不斷向前。
基因-蛋白-代謝-表型之間的互動(dòng)成為生命科學(xué)研究中研究的范式⁽¹⁾，研究成果可謂精妙紛呈、大放異彩。
圖1：基因-蛋白-代謝-表型之間的互動(dòng)成為生命科學(xué)研究中研究的范式⁽¹⁾
代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)研究
其中代謝物處于“中心法則”的終端，既可提供生物表型的外在表現(xiàn)信息，又可反過來調(diào)節(jié)基因組、轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的水平來影響細(xì)胞的生理功能。代謝組學(xué)及脂質(zhì)組學(xué)從提出至今，已迅速發(fā)展成為系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，在代謝性疾病、阿爾茲海默癥、糖尿病、肥胖、非酒精性脂肪肝及腫瘤等疾病相關(guān)研究中發(fā)揮著重要作用。
作為生物體內(nèi)重要的功能物質(zhì)之一，脂質(zhì)具有多種生物學(xué)功能，與細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)、疾病感染、免疫功能, 以及胎兒代謝缺陷等都密切相關(guān)�！笆濉币�(guī)劃、重大項(xiàng)目指南等均將脂質(zhì)列為重點(diǎn)研究內(nèi)容，近期多篇文章均發(fā)現(xiàn)脂類代謝發(fā)生了重要改變⁽²⁻³⁾，其研究受到越來越多的關(guān)注。
已知的潛在生物標(biāo)志物多來源于氨基酸、�；鈮A、神經(jīng)遞質(zhì)、脂類等。作為生物標(biāo)志物和疾病機(jī)制研究中重要內(nèi)容和目標(biāo)，如何在對(duì)代謝物實(shí)現(xiàn)流程標(biāo)準(zhǔn)化和定量化的基礎(chǔ)上，最大限度地提高代謝物的檢測(cè)種類和數(shù)量，以更加全面真實(shí)地反映機(jī)體在內(nèi)外因素?cái)_動(dòng)下代謝狀態(tài)的變化，是目前代謝組學(xué)分析技術(shù)面臨的最大挑戰(zhàn)之一。
賽默飛和合作伙伴公司合作推出的AbsoluteIDQ p400 HR Kit，在標(biāo)準(zhǔn)化和定量化上邁出了重要的一步。我們?cè)赒 Exactive Plus 和TSQ Altis上均驗(yàn)證了此方法，可滿足不同檢測(cè)需求：
左圖為Q Exactive™ Plus 組合型四極桿Orbitrap™ 質(zhì)譜儀；右圖為TSQ Altis™三重四極桿質(zhì)譜儀
檢測(cè)指標(biāo)：
低至10μL基質(zhì)樣品，最多可檢測(cè)408種代謝物，包括氨基酸、生物胺類、�；鈮A以及脂類；
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
基于標(biāo)準(zhǔn)品和穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)建立，定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠；樣品處理流程標(biāo)準(zhǔn)化、通量化；
檢測(cè)方法：
Q Exactive 系列超高分辨質(zhì)譜檢測(cè)，檢測(cè)指標(biāo)更多更全，特異性更強(qiáng)；
嚴(yán)格質(zhì)控：
附帶Start kit及系統(tǒng)適用性測(cè)試kit，并采用QC樣本精確質(zhì)控；
圖3：氨基酸、生物胺類、脂類等11類化合物信息
氨基酸和生物胺定量分析
針對(duì)氨基酸和生物胺類物質(zhì)極性大、某些代謝物含量低、基質(zhì)復(fù)雜等問題，采用衍生化試劑進(jìn)行衍生，穩(wěn)定同位素標(biāo)記化合物作為內(nèi)標(biāo)的方法成為解決這些問題行之有效的研究策略。我們采用異硫氰酸苯酯作為衍生化處理，研究血漿中41種氨基酸和生物胺類代謝物。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這種方法不但增強(qiáng)了代謝物的保留行為，獲得良好的色譜峰形，同時(shí)靈敏度也得到了提升，下圖為41種代謝物的提取離子流圖。
圖4 血漿中41種小分子代謝物提取離子流圖
脂質(zhì)定量分析
脂類代謝物因其結(jié)構(gòu)上的不同，NIH將之分為磷脂、鞘脂、甘油酯、膽固醇等八大類。同類代謝物在質(zhì)譜上往往具有類似的特性，研究者利用這一特點(diǎn)開發(fā)出一種有效的分析方法，利用穩(wěn)定同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)來定量一類脂質(zhì)，方法簡(jiǎn)單可靠。
采用這種方法，可準(zhǔn)確定性定量NIST 1950標(biāo)準(zhǔn)血漿中 215種脂類信息，包含�；鈮A類、甘油磷脂類、鞘脂類、神經(jīng)酰胺、甘油酯等。本方法適用于血漿、血清、尿液、組織樣本中的檢測(cè)，最多可檢測(cè)到365種脂類成分，大部分脂類QC準(zhǔn)確度在90~110%之間，符合生物樣品定量分析的需求。
圖5：�；鈮A類QC 準(zhǔn)確度
表1 NIST 1950標(biāo)準(zhǔn)血漿中可檢測(cè)到的脂類信息
多中心驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
前文我們提到，代謝組學(xué)要想全面進(jìn)入臨床醫(yī)學(xué)和健康產(chǎn)業(yè)的服務(wù)領(lǐng)域，需要花大力氣解決技術(shù)平臺(tái)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化問題。賽默飛公司的研究者作出了大膽的嘗試，努力為各領(lǐng)域的研究者保駕護(hù)航。
我們?cè)?/FONT>Q Exactive 系列平臺(tái)上開展了一項(xiàng)多中心的Ring-trial。該實(shí)驗(yàn)由全球5個(gè)國家和地區(qū)的14個(gè)實(shí)驗(yàn)室參與，共分為2個(gè)階段：
第一階段
由各實(shí)驗(yàn)室人員采用AbsoluteIDQ p400 HR Kit試劑盒獨(dú)立進(jìn)行樣品前處理和數(shù)據(jù)采集；
第二階段
12批次樣品的雙盲實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)旨在提供數(shù)據(jù)說明，同一批次樣品在不同研究中心、操作人員、儀器平臺(tái)的測(cè)試結(jié)果的可重現(xiàn)性
多中心實(shí)驗(yàn)室開展的研究結(jié)果表明, 各實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果具有較好的重現(xiàn)性，氨基酸和生物胺類代謝物偏差RSD<25%.
目前靶標(biāo)代謝組學(xué)的研究中，串聯(lián)四極桿質(zhì)譜是最常用的技術(shù)之一。隨著高分辨質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，采用高分辨質(zhì)譜同時(shí)定性定量的方式顯示出來獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。以Orbitrap為代表的超高分辨質(zhì)譜在靈敏度、線性范圍、精密度等方面已能媲美串聯(lián)四極桿質(zhì)譜。
因此，基于高分辨質(zhì)譜定量技術(shù)正日益成為包括靶向代謝組學(xué)在內(nèi)的生物樣品分析的研究熱點(diǎn)。
標(biāo)簽：
高分辨質(zhì)譜；賽默飛
- ICP-MS測(cè)定土壤和沉積物中重金屬的不同前處理方法對(duì)比研究
- AFADESI-Orbitrap助力癌癥代謝機(jī)制研究，加速精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)
- 賽默飛無機(jī)質(zhì)譜技術(shù)在測(cè)量同位素比值中的應(yīng)用
- 聯(lián)用質(zhì)譜助力生物制藥質(zhì)控升級(jí)，毫克級(jí)電荷異構(gòu)體制備新突破
- 輝光放電質(zhì)譜法助力高純度固體無機(jī)樣品的快速痕量元素分析
- 賽默飛Stellar質(zhì)譜儀在血漿蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用
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