一、SILAC概述
         SILAC即細胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標記技術(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC)，其基本原理是在細胞培養(yǎng)時，采用含有輕、中、重同位素型必需氨基酸的培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)，用于SILAC主要的穩(wěn)定同位素氨基酸是Lys和Arg, 細胞在傳代培養(yǎng)過程中同位素氨基酸將被細胞用于合成蛋白質(zhì)，細胞經(jīng)傳代培養(yǎng)5-6代后，細胞的所有蛋白質(zhì)將被同位素標記，等量混合標記的蛋白質(zhì)后經(jīng)過SDS-PAGE分離和質(zhì)譜分析，通過比較一級質(zhì)譜圖中三個同位素型肽段的面積大小進行相對定量，同時二級譜圖對肽段進行序列測定從而鑒定蛋白質(zhì)。

         由于SILAC標記技術是體內(nèi)標記技術，幾乎不影響細胞的功能，同時靈敏度高，因此其在蛋白質(zhì)組學相關領域中得到了廣泛的應用，如比較蛋白質(zhì)組學，蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用，蛋白質(zhì)與DNA相互作用，蛋白質(zhì)與RNA相互作用等領域。
 
二、與體外標記技術相比，輝駿生物SILAC屬于體內(nèi)標記，具有以下技術優(yōu)勢
     1、高通量，可同時鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質(zhì)；
     2、定量精確，降低由于樣品制備不同而造成的實驗差異；
     3、線性定量范圍廣；
     4、靈敏度更高，蛋白質(zhì)需要量明顯減少；
     5、標記采用的是體內(nèi)標記技術，更接近樣品真實狀態(tài)。
 
三、輝駿生物SIALC技術服務流程
 
 
四、輝駿生物SILAC技術服務內(nèi)容
    1、細胞同位素標記；
    2、樣本制備與定量；
    3、SDS-PAGE分離；
    4、胰酶酶切后液相分離和質(zhì)譜分析；
    5、數(shù)據(jù)庫檢索；蛋白質(zhì)定量分析；
    6、相關生物信息學分析；
    7、實驗報告提交。
 
五、送樣須知
    1、技術咨詢：在您開始實驗之前，本公司將為您竭誠提供最有效的SILAC實驗設計方案，本公司提供Lys和Arg均為L、M 、H標記的氨基酸。
    2、為了保證SILAC實驗能順利進行，樣品寄送需滿足以下要求：
   基本要求：SILAC實驗僅適用于能在SILAC培養(yǎng)基中培養(yǎng)的材料，具體情形請咨詢本公司。
   運輸要求：液氮或干冰保存寄送，廣州本地客戶可上門收樣。
   注：樣本應避免各類污染和反復凍融。
 
六、輝駿生物實驗報告內(nèi)容
    1、蛋白質(zhì)鑒定和SILAC定量分析結(jié)果；
    2、顧客指定蛋白質(zhì)對應的質(zhì)譜峰圖；
    3、SILAC實驗完整的實驗步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。
 
七、輝駿生物質(zhì)量承諾
    1、嚴謹?shù)腟ILAC實驗設計方案確保定量分析結(jié)果可靠；
    2、提供客觀的SILAC實驗分析結(jié)果。