瓊脂糖凝膠4B

瓊脂糖凝膠4B是用4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒，作為凝膠層析介質(zhì)使用。

1 理化指標(biāo)

 *檢測條件： 層析柱10mm×300mm  *柱床高5cm，25℃，流動相為0.1mol/LNaCl。

2 貯存

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。保質(zhì)期：5年。

3 應(yīng)用

本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì)，非特異性吸附低，回收率高，可多次重復(fù)使用等特點，用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。

3.1 裝柱

（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。

（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，用去離子水清洗掉20%乙醇，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無氣泡。

（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。

3.2 平衡

讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

建議使用離子強度為0.15或更大的緩沖液，以避免溶質(zhì)分子和基質(zhì)之間的任何不需要的離子相互作用。對于各Sepharose凝膠的推薦流速，請參考推薦流速越低，分離度越高。

3.3 上樣

（1）樣品用平衡液配制，樣品一定要離心或過濾后上樣。 

（2）推薦的樣品體積為總床體積的2-5%。

3.4 洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

3.5 再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。

在一些應(yīng)用中，諸如變性蛋白質(zhì)或脂質(zhì)的物質(zhì)在再生過程中洗脫不掉。 這些可以使用下述步驟清除。

出現(xiàn)下面這些情況，是必須需要清洗再生的：

（1）背壓增加；

（2）色譜柱頂部的顏色變化；

（3）分辨率降低；

（4）轉(zhuǎn)換接頭和凝膠表面之間出現(xiàn)空隙。

如果觀察到增加的背壓，在開始柱清潔程序之前先檢查管路中的各個過濾閥、過濾膜是否被污染；

通過用0.1M NaOH以推薦線性流速洗滌柱子，除去沉淀的蛋白質(zhì)，非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和脂蛋白。

3.6 注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候，始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

注意事項：

1.上樣之前，樣品必須經(jīng)過膜過濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。

2.在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于0.15摩爾。堿會使流速變慢。

3.不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。