黃嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/96 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

XOD（EC 1.17.3.2）催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來(lái)源之一；同時(shí)也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD 主要分布于哺乳動(dòng)物的心，肺，肝臟等組織中，當(dāng)肝功能受損時(shí)，XOD 大量釋放到血清中，對(duì)肝損害的診斷具有特異性的意義。

測(cè)定原理：

XOD 催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：30mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存。

粗酶液提�。�

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

操作步驟：

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 290nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 XOD 檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)在每瓶試劑二中加入 15mL 試劑一，充分混勻，待用；現(xiàn)

配現(xiàn)用；3、 測(cè)定前將 XOD 檢測(cè)工作液在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4、 準(zhǔn)備 96 孔 UV 板一塊（非普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見光，不能透過(guò)紫外光，

檢測(cè)波長(zhǎng)小于 340nm 務(wù)必使用 UV 板）。

5、在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μL 樣本和 250μL 工作液，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄 290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計(jì)算 ΔA＝A2-A1。

XOD 活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）XOD 計(jì)算：

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=2131×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 XOD 計(jì)算：（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。