導(dǎo)語

你所在的細胞培養(yǎng)實驗室是功能完善的細胞培養(yǎng)實驗室嗎，不但要布局合理，還要操作安全、方便，并能避免污染，既能滿足工作需要，又能保證檢驗結(jié)果不受干擾。防火、防潮、防腐性能樣樣兼?zhèn)�，通風(fēng)、凈化、消毒、滅菌功能更是必不可少。遵循安全、高效、舒適以及“以人為本”的原則，才能建成正規(guī)化、標準化的細胞培養(yǎng)實驗室，達到的使用效率。

   一、細胞培養(yǎng)實驗室設(shè)計與布局

組織細胞培養(yǎng)技術(shù)研究的對象不一般，它是具有完整生命力的生物單位，因此與其他一般實驗工作不同，要求保持無菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。

細胞培養(yǎng)實驗室應(yīng)能進行六方面的工作：無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。

各部門分別設(shè)置于相連的各個房間，特別是無菌操作室能單獨設(shè)置；如都安置在一大實驗室內(nèi)，無菌操作區(qū)與清洗、消毒滅菌區(qū)應(yīng)分別位于兩端，而制備、儲藏和孵育區(qū)位于此兩區(qū)之間。

1.無菌操作區(qū)

（1）無菌操作室：只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域，能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。

理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分：

•更衣室——供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

•緩沖間——位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境，同時可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。

•無菌操作間—―專用于無菌操作、細胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng)，且其頂部不宜過高（不超過2.5m）以保證紫外線的有效滅菌效果；墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作臺安置不應(yīng)靠墻壁，臺面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。

（2）超凈工作臺/生物安全柜:操作簡單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。

兩者的基本原理都有通過風(fēng)機的作用將氣體經(jīng)過高效過濾器后形成無塵無菌的高潔凈度目標環(huán)境的過程，因此儀器所配置的風(fēng)機和高效過濾器的性能直接決定了目標環(huán)境潔凈度的等級。

超凈工作臺與生物安全柜的區(qū)別：

2.孵育區(qū)

本區(qū)對無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴格，但仍需清潔無塵，因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。一般實驗室多采用孵箱進行孵育工作。

3.制備區(qū)

在該區(qū)主要進行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。在有天平、_PH計、磁力攪拌器等設(shè)備下完成制備以后，應(yīng)在無菌操作臺進行過濾除菌。液體制備看似簡單，但也馬虎不得，它直接關(guān)系組織細胞培養(yǎng)的成敗，如果不嚴格無菌操作也許就會上演年度大戲——藍瘦香菇。

4.儲藏區(qū)

對儲藏區(qū)的要求是取放方便，主要有冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等，此環(huán)境也需要清潔無塵。

5.清洗和消毒滅菌區(qū)

清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開，主要進行細胞培養(yǎng)器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。

二、常用的基本設(shè)備

組織細胞培養(yǎng)研究生產(chǎn)的必須設(shè)備，缺少則無法進行工作。

1.儀器

（1）顯微鏡

為了掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。若實驗室經(jīng)費允許，能配置帶有照相系統(tǒng)的高質(zhì)量相差顯微鏡，便可隨時攝影、記錄細胞的情況，對科研工作的開展大有幫助，若有條件，還可添置解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)裝置。

（2）培養(yǎng)箱

體外培養(yǎng)的細胞和體內(nèi)細胞一樣，都需要在恒定而適宜的溫度下才能生存。大多數(shù)哺乳動物細胞的適宜培養(yǎng)溫度是35至37℃，細胞在溫度升高2℃時，持續(xù)數(shù)小時即不能耐受，40℃以上將很快死亡，因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱。如恒溫培養(yǎng)箱及二氧化碳培養(yǎng)箱，均有較高的靈敏度。此外，動物細胞多數(shù)需要在微堿性環(huán)境存活和生長，pH為7.2~7.4，以不超出6.8~7.6為宜。CO₂既是細胞所需成分，也是細胞代謝產(chǎn)物，它與大多數(shù)培養(yǎng)基中的碳酸氫鈉形成緩沖體系，維持生理pH。二氧化碳培養(yǎng)箱能夠精確控制二氧化碳濃度，普通的恒溫培養(yǎng)箱卻無法實現(xiàn)�，F(xiàn)在開放或半開放的細胞培養(yǎng)實驗室多選用二氧化碳培養(yǎng)箱。廣受科研工作者認可的是氣套式、配置紅外傳感器的二氧化碳培養(yǎng)箱，這些培養(yǎng)箱比一般普通的培養(yǎng)箱靈敏度高，溫度及二氧化碳濃度也較穩(wěn)定。

（3）烘箱

用于細胞培養(yǎng)的有些器械、器皿要烘干才能使用。玻璃器皿需干熱消毒，因此，細胞培養(yǎng)實驗室均配置有電熱干燥箱/烘箱。

（4）水純化裝置

細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求很高，所用的水必須先純化處理。水純化時可采用離子交換純水裝置或蒸餾器。

（5）冰箱

細胞培養(yǎng)室必須配備有普通冰箱或冷藏箱，冰箱有一臺低溫冰箱（-20℃）。前者用于儲存培養(yǎng)液、生理鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期存放組織標本。-20℃超低溫冰箱則可用于儲存那些需要冷凍保持生物活性及較長時期存放的制劑。

（6）細胞冷凍儲存器

細胞培養(yǎng)工作常需要儲存細胞，液氮溫度很低，達-196℃，在此溫度下，細胞的物質(zhì)代謝和生命活動幾乎完全停止。因此常用液氮容器儲存細胞。使用時要防止凍傷。由于液氮不斷揮發(fā)，應(yīng)注意觀察存留液氮情況，及時定期補充液氮，避免揮發(fā)過多而致細胞受損。

（7）離心機

用于制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞。

（8）消毒器

直接或間接與細胞接觸的的物品均需消毒滅菌處理。如另設(shè)有統(tǒng)一的消毒供應(yīng)室，有些常用的，較大的物品可由該室消毒滅菌后提供。即使如此，有時臨時需加用的物品或易破碎的器皿仍需細胞培養(yǎng)實驗室自行消毒，因此應(yīng)配置有本實驗室的消毒器，常見選用高壓蒸氣滅菌器。

（9）天平和濾器

配置培養(yǎng)液、消化用胰酶溶液、緩沖液等培養(yǎng)細胞所需試劑需要用天平進行稱量，配置好后仍需用濾器對其過濾除菌，方可用于細胞培養(yǎng)。

2.培養(yǎng)用器皿

要求：透明度好、無毒

與培養(yǎng)操作有關(guān)器皿:吸管、移液器

除此之外，收集細胞使用的離心管，放置試劑或臨時插置吸管用的試管，以及用于細胞計數(shù)的血球計數(shù)板或自動細胞計數(shù)儀器，都是細胞培養(yǎng)實驗室需配置的器材。有時還需要存放小件培養(yǎng)物品，為方便進行高溫消毒許多實驗室會選擇用鋁飯盒用于盛裝物品。

 三、特殊設(shè)備

為了更高效、精確、深入地開展細胞科學(xué)地研究，有條件（土豪）的實驗室可添置一些特殊的、先進的、精密的設(shè)備儀器，如多功能酶聯(lián)免疫分析儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀、細胞擴增系統(tǒng)（生物反應(yīng)器）等。

生物反應(yīng)器

結(jié)語

Esco對標準細胞培養(yǎng)實驗室建設(shè)的分享，讓你面對細胞培養(yǎng)實驗室建設(shè)或升級改造任性說So easy!