二、細(xì)胞收到后操作流程

1.收到細(xì)胞拿回實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用 75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，放到顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，細(xì)胞會(huì)有不同程度影響，先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，放到培養(yǎng)箱靜置 4 小時(shí)左右，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片作為后期售后依據(jù))。建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

3.貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò) 80%時(shí)，根據(jù)情況傳代，若細(xì)胞未超過(guò) 80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25 瓶）保留 6-8ml 完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度超過(guò) 80%以后再進(jìn)行傳代。

4.懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體轉(zhuǎn)移至離心管，1000RPM 離心 5 分鐘，棄去上清液，管底細(xì)胞沉淀加入 10ml 完全培養(yǎng)基吹打、重懸。放入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿中培養(yǎng)過(guò)夜，根據(jù)細(xì)胞密度及生長(zhǎng)情況分瓶傳代。

三、細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)步驟（請(qǐng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作）

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中，加入約 6ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜），第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。