動(dòng)物細(xì)胞糖蛋白高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

動(dòng)物細(xì)胞糖蛋白高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑是一種旨在通過阿爾新藍(lán)和高碘酸希爾方法的結(jié)合，完整互補(bǔ)地分析細(xì)胞樣品中蛋白多糖（糖蛋白）成分的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞中的糖蛋白成分，尤其是酸性和中性粘多糖蛋白檢測(cè)。產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

阿爾新藍(lán)（alcian blue）染料是一種水溶性的銅酞菁基團(tuán)（cuprophthalocyanine group）的堿性染料。由于分子中銅的存在，而呈現(xiàn)藍(lán)色。在低pH的環(huán)境下，阿爾新藍(lán)與多價(jià)陰離子硫酸化（sulfated）和羧化（carboxylated）自由基的多價(jià)陰離子反應(yīng)，例如酸性粘多糖蛋白（acidic mucopolysaccharide）、唾液粘多糖蛋白（sialomucins）以及糖蛋白，和酸性基團(tuán)形成鹽鍵（salt linkage），呈現(xiàn)（通常高碘酸希爾法陰性）藍(lán)色。高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成為乙醛基團(tuán)（aldehyde group），與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)品紅色（magenda）或紫紅色，表明中性粘多糖蛋白陽性。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）  100毫升

酸性液（Reagent B）   10毫升

染色液A（Reagent C）   10毫升

氧化液（Reagent D）   10毫升

染色液B（Reagent E）   10毫升

產(chǎn)品說明書    1份

保存方式

保存在室溫下；染色液A（Reagent C）和染色液B（Reagent E），嚴(yán)格密封瓶口，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

通用型蘇木素復(fù)染試劑盒（80067.1）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

操作一：細(xì)胞載玻片染色

一、樣本阿爾新藍(lán)染色處理

• 取出待測(cè)的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細(xì)胞涂片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升酸性液（Reagent B），鋪滿整個(gè)載玻片或細(xì)胞涂片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的酸性液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細(xì)胞涂片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8一次
• 小心加上200微升染色液A（Reagent C），鋪滿整個(gè)載玻片或細(xì)胞涂片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見藍(lán)色，避免光照
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的染色液A（Reagent C）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細(xì)胞涂片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14一次

二、樣本高碘酸希爾染色處理

• 小心加上200微升氧化液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的氧化液（Reagent D）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細(xì)胞涂片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5一次
• 小心加上200微升染色液B（Reagent E），鋪滿整個(gè)載玻片或細(xì)胞涂片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘；或直至可見深紅色，避免光照
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的染色液B（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細(xì)胞涂片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片或細(xì)胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟10至11一次

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

• 樣本復(fù)染處理（建議使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒－80067.1）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：

酸性粘多糖蛋白――亮藍(lán)色

中性粘多糖蛋白和其它糖蛋白――品紅色

混合粘多糖蛋白――藍(lán)色或紫色

細(xì)胞核――深藍(lán)色（復(fù)染）

操作二：24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

一、樣本阿爾新藍(lán)染色處理

• 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細(xì)胞表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 小心加入400微升酸性液（Reagent B），覆蓋整個(gè)生長表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心抽去酸性液（Reagent B）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8一次
• 小心加入400微升染色液A（Reagent C），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見藍(lán)色，避免光照
• 小心抽去染色液A（Reagent C）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14一次

二、樣本高碘酸希爾染色處理

• 小心加入400微升氧化液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心抽去氧化液（Reagent D）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5一次
• 小心加入400微升染色液B（Reagent E），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘；或直至可見深紅色，避免光照
• 小心抽去染色液B（Reagent E）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟10至11一次

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

• 樣本復(fù)染處理（建議使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒－80067.1）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：

酸性粘多糖蛋白――亮藍(lán)色

中性粘多糖蛋白和其它糖蛋白――品紅色

混合粘多糖蛋白――藍(lán)色或紫色

細(xì)胞核――深藍(lán)色（復(fù)染）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次（細(xì)胞載玻片）和25次（1個(gè)24孔板）操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 所有操作在室溫下進(jìn)行
• 避免單純使用甲醛和乙醛等處理樣品；建議使用 Bouin固著液—12267
• 試劑可以重復(fù)使用
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 試劑溶液避免細(xì)菌污染
• 染色液B（Reagent E）出現(xiàn)沉淀，可以溫?zé)帷�攪拌或過濾后使用
• 染色液B（Reagent E）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見深藍(lán)或深紅色即可終止染色
• 如果檢測(cè)胞漿糖蛋白，需要進(jìn)行樣品預(yù)處理，例如：甲醛熏蒸（formaldehyde vapor）；或無水甲醇固定15分鐘；或微波爐加熱染色45秒
• 可以使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒（80067.1），增強(qiáng)染色對(duì)比度
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰