杭州奧盛推出的Nano-300微量分光光度計(圖1),能夠快速檢測核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞溶液,每次檢測僅需0.5μl-2μl樣品。為檢測其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,現(xiàn)將Nano-300與國外某知名品牌最新產(chǎn)品做dsDNA檢測對比。
圖1. Nano-300微量分光光度計
1.實驗方法
首先將dsDNA標(biāo)品從最高濃度用TE緩沖液梯度稀釋,每次稀釋2倍,共稀釋9次。在兩款儀器上檢測dsDNA樣品,每個樣品重復(fù)檢測4次,記錄數(shù)據(jù),并計算核酸濃度的平均值(mean)和標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)和變異系數(shù)(CV)。
2.實驗結(jié)果
2.1 檢測界面
Nano-300和國外品牌均采用圖標(biāo)化設(shè)計軟件界面,檢測界面直接顯示檢測數(shù)據(jù)及樣品的峰型,直觀讀出樣品的濃度、OD230、OD260、OD280以及OD260與OD230、OD280的比值,非常容易得出樣品是否有雜峰,是否含有雜質(zhì)。
2.2 準(zhǔn)確性結(jié)果比較
我們檢測了9個稀釋后的dsDNA樣品,并計算dsDNA濃度的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差(圖3)。從圖中可以看出兩款儀器檢測的dsDNA濃度趨勢符合稀釋后的濃度梯度,而且對比這兩款儀器的檢測結(jié)果,在不同濃度樣品中dsDNA濃度相差不大。
圖3.樣品濃度平均值對比
(由于我們不知道樣品的濃度,因此我們以樣品的濃度倍數(shù)作為橫坐標(biāo))
2.3 線性結(jié)果比較
將檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行線性擬合,發(fā)現(xiàn)兩款儀器的R2是一致的(圖4),結(jié)果表明Nano-300與國外品牌檢測結(jié)果一樣具有線性。
圖4. Nano-300(左)和國外品牌(右)線性對比
2.4穩(wěn)定性結(jié)果比較
兩款儀器再穩(wěn)定性方面均表現(xiàn)優(yōu)秀(表1),國外品牌在樣品濃度低于10ng/μl時CV值為3.78%,CV值隨著檢測濃度的上升而降低,當(dāng)濃度高于50ng/μl后,CV值小于1%;Nano-300在各個濃度范圍表現(xiàn)良好,CV值最高也僅為2.02%。上述數(shù)據(jù)顯示,Nano-300檢測穩(wěn)定性在低濃度時要略優(yōu)于國外品牌。
表1. Nano-300和國外品牌檢測結(jié)果對比
2.5 OD260/OD280比值比較
表3是OD260/OD280、OD260/OD230結(jié)果比較,從總體上看,這兩款儀器的兩個比值相差不大。Nano-300檢測結(jié)果OD260/OD280比值基本上在1.8~1.9之間;國外品牌檢測結(jié)果OD260/OD280比值較高,在1.9附近。但在低濃度時,Nano-300穩(wěn)定性優(yōu)于國外品牌。兩者OD260/OD230比值及穩(wěn)定性均差異不大。
表3. OD260/OD280、OD260/OD230結(jié)果比較
3.結(jié)論
a.兩款儀器操作界面均采用圖形化,但是國外品牌在操作便捷性以及結(jié)果處理上要優(yōu)于Nano-300;
b.這兩款儀器在檢測dsDNA時準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性接近,且線性良好,在低濃度時,Nano-300的穩(wěn)定性要優(yōu)于國外品牌;
c.在接近檢測極限時,兩者都不能很真實的反映樣品的純度,隨著濃度的上升儀器穩(wěn)定性、結(jié)果可靠性增加。